[发明专利]提高咀嚼式口器昆虫RNA干扰效率的方法在审
| 申请号： | 201610151492.3 | 申请日： | 2016-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN105779502A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 王冰洁;袁向东;梁革梅;张万娜;魏纪珍 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87;A01K67/033 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 咀嚼 口器 昆虫 rna 干扰 效率 方法 | ||
1.提高咀嚼式口器昆虫RNA干扰效率的方法，其特征在于，包 括以下步骤：
1)用无RNA酶的水将靶基因特异性siRNA配成一定浓度的溶液；
2)将人工饲料加工成3～5mm厚、直径1～2cm的圆片，置于24孔 板中；
3)取1)的溶液加在2)的圆片上，使溶液被饲料完全吸收；
4)将初孵的咀嚼式口器昆虫幼虫，放入3)的有饲料圆片的24 孔板中，饲喂一段时间后，检测昆虫中靶基因的表达量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述溶剂 包括水。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)用无RNA 酶的水将靶基因特异性siRNA配成浓度0.015nmol/L的溶液。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤2) 人工饲料经干燥后，加工成3～5mm厚、直径1.5cm的圆片，置于24孔 板中。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤3) 具体为：取1)的溶液60-80μl加在2)的圆片上，使溶液被饲料完全吸 收。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤4) 将初孵的咀嚼式口器昆虫幼虫，放入3)的有饲料圆片的24孔板中， 饲喂2～4天后取样，提取总RNA，反转录成cDNA，用荧光定量PCR 检测昆虫中靶基因的表达量。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述靶基 因包括氨肽酶N基因，其特异性siRNA序列为： 5'-GCAACUACUCCAUCGCCAUTT-3'。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，步骤3) 具体为：取1)的溶液75μl加在2)的圆片上，使溶液被饲料完全吸收， 步骤4)将初孵的咀嚼式口器昆虫幼虫，放入3)的有饲料圆片的24 孔板中，饲喂2天后，检测昆虫中靶基因的表达量。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述昆虫 包括棉铃虫。
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