[发明专利]一种用于蚋类昆虫分类和鉴定的引物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于蚋类昆虫分类和鉴定的引物，其特征在于，所述用于蚋类昆虫 分类和鉴定的引物序列：

SEQIDNO：1TATGTACTACCATGAGGACAAATATC；

SEQIDNO：2AGCAAATAAAAAATATCATTC。

2.如权利要求1所述的用于蚋类昆虫分类和鉴定的引物，其特征在于，所 述用于蚋类昆虫分类和鉴定的引物片段370bp。

3.一种如权利要求1所述用于蚋类昆虫分类和鉴定的引物的制备方法，其 特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

步骤一，总DNA的提取，采用试剂盒法，用100μL洗脱液溶解提取的样 品，采用核酸滴定仪测定提取DNA的浓度及纯度，进行样品检测或者置于-20℃ 保存、备用；

步骤二，引物筛选，选出备选上游引物13条，下游引物13条，引物序列 SEQIDNO：1与SEQIDNO：2的组合；

步骤三，以所得基因组DNA为模板，利用上述两对引物对基因组DNA中 的线粒体cytb基因进行PCR扩增；

步骤四，取适量的PCR扩增产物用琼脂糖电泳检测结果，经溴化乙锭染色 后于紫外灯下观察，两对引物扩增的片段大小分别为370bp，将得到的特异性 产物测序，利用Chromas2.4软件读取测序结果。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述PCR反应体系和条件 为：PCR反应体系为25μL，含2×PCRMastermix12.5μL，正/反向引物各 3μL，DNA模板2μL，含20～50ngDNA，ddH₂O补足25μL；

PCR反应条件为：94℃下预变性2min；而后35个循环，每个循环包括 94℃变性30s，41-51℃退火30s，72℃延伸30s；最后72℃延伸5min。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述蚋类分子鉴定引物使 用1％琼脂糖电泳检测。