[发明专利]用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂及其制备方法

说明书

本发明用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂及其制备方法，涉及免疫学研究技术，包括如下步骤：(1)获取可表达IL‑6蛋白的真核细胞的培养液上清，所述细胞培养液上清中含有表达的IL‑6蛋白；(2)对细胞培养液上清进行超滤，然后过滤除菌，获得细胞培养液上清浓缩液；(3)向细胞培养液上清浓缩液中加入亚硒酸钠，获得所述添加剂。试验数据证明，采用该添加剂之后杂交瘤细胞克隆数量可提高将近5倍。本发明还进一步提供了含有上述添加剂的杂交瘤细胞培养基。

技术领域

本发明涉及用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂及其制备方法，属于生物及医药领域。

背景技术

免疫学是当今医疗和科研必不可少的一部分。自40年前Edelman和Porter率先分离出免疫球蛋白分子之后，抗体已被应用于很多方面。抗体应用于蛋白质组学和诊断学方面以检测肿瘤和细菌抗原；还可以在山羊奶和植物中合成以作为疫苗和抗肿瘤因子；还可用作药物载体工具以治疗病毒、细菌感染和肿瘤。

杂交瘤技术及单克隆抗体的生产为研究工作带来了革命，提供了无数的、独特的单克隆抗体试剂，用于特异性抗原的鉴定、分离、清除、活化或检测等。制备分泌抗体的B细胞杂交瘤细胞依赖于抗原反应性B细胞与永生化的骨髓瘤细胞高效率的融合，以及随后的鉴定和对能持续生长的能产生特异性抗体的细胞系的分离。在细胞融合的过程中，细胞会受到不同程度的损伤。为了使融合后的杂交瘤细胞获得最佳生长条件、增加杂交瘤的产量，在杂交瘤细胞克隆化培养中，需要添加一些额外的生长因子或补充物。有些实验室会使用滋养细胞层(脾细胞或腹腔巨噬细胞)。滋养层的作用一般认为有如下几个方面：1、产生某些细胞因子来调节杂交瘤细胞的生长；2、增加细胞浓度以促进单个或少数分散杂交瘤密度依赖细胞的繁殖(单克隆抗体-杂交瘤技术讲义，第四军医大学微生物学教研室编)；3、吸收某些有害的代谢产物；4、吞噬清除死细胞及其碎片；5、抑制可能的污染的微生物的生长(Keith James，et a.Human monoclonal antibody production current status andfuture prospects.J Immunol Meth 1987；100:5)等。除了饲养层细胞，也可以使用IL-6来源的商品化的添加物(Origen HCF.IGEN Inc，Gaithersburg,MD)。然而，在制备饲养层细胞时，每次融合都要杀掉4-5只小白鼠，不利于动物福利，而商品化的杂交瘤添加物价格又比较昂贵。

发明内容

本发明提供一种用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂，既能够有效促进杂交瘤细胞的生长，又能降低生产成本并保护动物，满足科研和医疗的需求。

本发明提供的技术方案如下：

用于提高杂交瘤克隆数量的添加剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)获取可表达IL-6蛋白的真核细胞的培养液上清，所述细胞培养液上清中含有表达的IL-6蛋白；

(2)对细胞培养液上清进行超滤，然后过滤除菌，获得细胞培养液上清浓缩液；

(3)向细胞培养液上清浓缩液中加入亚硒酸钠，获得所述添加剂。

本发明的技术方案中，所述超滤是指，用截留高分子量的超滤管对细胞培养上清进行超滤后，再用截留低分子量的超滤管对滤过液进行浓缩；所述过滤除菌是指，用0.22μm的滤膜对浓缩后的细胞培养上清进行过滤。

本发明的一些技术方案中，所述截留高分子量的超滤管的规格选自30KD、50KD和100KD中的任何一种，所述截留低分子量的超滤管的规格选自3KD、5KD和10KD中的任何一种。其中一组优选为：所述截留高分子量的超滤管的规格50KD，所述截留低分子量的超滤管的规格10KD。

本发明的技术方案中，优选所述亚硒酸钠的终浓度为1mg/L-10μg/L。