[发明专利]用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂及其制备方法

权利要求书

1.用于提高杂交瘤克隆数量的添加剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）获取可表达IL-6蛋白的真核细胞48小时以内的培养液上清，所述细胞培养液上清中含有表达的IL-6蛋白；

（2）用截留50KD的超滤管对细胞培养液上清进行超滤后，再用截留10KD的超滤管对滤过液进行浓缩，然后过滤除菌，获得细胞培养液上清浓缩液；

（3）向细胞培养液上清浓缩液中加入亚硒酸钠至终浓度为1mg/L-10µg/L，获得所述添加剂；

所述可表达IL-6蛋白的真核细胞选自转化有可表达IL-6蛋白的重组表达载体的CHO细胞系。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述过滤除菌是指，用0.22µm的滤膜对浓缩后的细胞培养液上清进行过滤。

3.根据权利要求1所述的制备方法，所述重组表达载体为pcDNA5／FRT-IL6，是以pcDNA5／FRT为骨架，pcDNA5／FRT和IL-6全长cDNA经过用KpnI和XbaI双酶切，经过电泳、切胶回收后，用T4 DNA连接酶过夜连接，连接产物转化感受态细胞E．coli DH5a，涂布Amp平板并挑取单菌落鉴定，鉴定正确的阳性克隆的质粒命名为pcDNA5/FRT-IL6。

4.用于提高杂交瘤细胞克隆数量的添加剂，其特征在于，采用权利要求1-3任一所述的制备方法制备。

5.杂交瘤细胞的培养基，其特征在于，是在含有10%胎牛血清的DMEM中添加有权利要求4所述的添加剂，添加的所述添加剂的体积比例为20%。

6.培养杂交瘤细胞的方法，其特征在于，在其培养基中添加体积比例为20%的权利要求4所述的添加剂，或采用权利要求5所述的培养基。