[发明专利]一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及牛樟芝的培养方法，具体涉及一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法。

背景技术

牛樟树是台湾特有植物，受到极度的重视，并列为保育类植物，而牛樟芝菌又只长于牛樟树，其他树木无法长出牛樟芝，牛樟芝对抑制癌症、预防癌症的转移、B型肝炎、糖尿病、高血压等疾病具有功效，并在抗氧化、抗血液中凝血、及肠胃疾病上也有相当的功效，牛樟芝的成份复杂，其中重要成份包括有：三萜类化合物、超氧歧化酵素、腺甘、β-D-葡聚糖等营养成份；其中三萜类化合物是牛樟芝最重要的化学成份之一，也是牛樟芝的萃取物中苦味成份的来源。以目前的研究结果得知，在每种灵芝内的三萜类含量约1-3％，而单牛樟芝一种就拥有15-45％的三萜类含量，三萜类的主要功能有抑制癌细胞的生长、抑制组织胺的释放，防止过敏、促进肝功能、促进血小板凝集、以及降血脂等作用，因此三萜类的含量及种类愈多，则愈有医疗价值。

现有牛樟芝人工栽培方法包括椴木栽培法、固态栽培法以及液态发酵法。椴木栽培法是使用枯死的牛樟树椴木，将牛樟芝菌体植入椴木中，使牛樟芝在椴木中生长，借此取得牛樟芝子实体。利用该种方法所得到的牛樟芝子实体，其所含有的成分与野生牛樟芝相似，然而，该种培养方式的成本高、培养时间长，不利于量产与推广。特别是牛樟树椴木取得不易，使得牛樟芝相关产品的价格高居不下。固态培养法主要是利用含有营养物质的太空包来培养牛樟芝所得到的牛樟芝其外观虽然与野生牛樟芝相似，但其三帖类化合物的含量低，并且其他主要成分与野生牛樟芝子实体并不相同。液态发酵法培养牛樟芝虽然可在短时间内收成牛樟芝液体发酵产品，但其主要产物为多醣类，并不含有三帖类化合物，并且其他主要成分与野生牛樟芝子实体相去甚远。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种加速牛樟芝生长速度，并且其主要成分如三帖类化合物、多醣体、腺苷等与野生牛樟芝相似的提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，包括以下步骤：

1)制备五叶松提取液：

将五叶松的根、茎、叶粉碎至粒径35～60μm，混合均匀后溶解于浓度20％的酒精中进行超声波破碎处理，破坏其细胞壁，使得五叶松脂溶出，所述超声波破碎条件为温度25-30℃，时间20-25min；超声破碎后再经过超临界流体萃取，提取五叶松脂，所述超临界流体萃取具体为：以液态二氧化碳为溶剂，在压力4000-5000psi下萃取30-35min，得到不同pH的五叶松提取液；

其中，根：茎：叶的比例为93-95：4-6：1时，得到pH＝5.5的五叶松提取液；

根：茎：叶的比例为45-50：35-40：15时，得到pH＝6.0的五叶松提取液；

根：茎：叶的比例为38-40：30-32：30时，得到pH＝6.5的五叶松提取液；

2)牛樟芝菌繁殖及活化

切取外围完整厚实的牛樟芝菌丝做为菌种，接入液体培养基中，于25-30℃下培养13-15天，形成牛樟芝菌丝球，完成菌丝活化；所述培养过程，控制二氧化碳浓度为1～5％，氧气浓度为5～15％；

3)初发酵

将步骤2)形成的牛樟芝菌丝球移至pH＝5.5的谷类培养基进行初发酵，并接上pH值自动感应器，当牛樟芝生长环境pH值低于5时，自动添加pH＝6.0的五叶松提取液，待牛樟芝子实体直径大于10cm时，自动添加pH＝6.5的五叶松提取液；同时，所述初发酵过程，采用震荡发酵，震荡速度为150-200r/min，温度28-30℃，同时控制二氧化碳浓度为1～5％，氧气浓度为5～15％，发酵3-5天；

其中，所述谷类培养基的制备方法如下：将谷类高温灭菌后与马铃薯葡萄糖琼脂培养基混合均匀，放置冷却成型，即为谷类培养基；

4)后发酵

初发酵3-5天后，将牛樟芝菌移植到新的谷类培养基进行后发酵，所述后发酵过程，当牛樟芝生长环境pH值低于5时，自动添加pH＝5.5的五叶松提取液，同时，控制二氧化碳浓度为1～5％，氧气浓度为5～15％，发酵40-45天以上。

所述五叶松的根、茎、叶在温度5～10℃，真空条件下进行粉碎。

所述步骤2)形成的牛樟芝菌丝球直径为0.5-1.0cm。

所述步骤2)中的液体培养基是指含蛋白胨及葡萄糖含量分別为5-7％和10-12％的营养液。

所述谷类是指玉米、小麦、薏仁、糙米、黑芝麻、荞麦、绿豆、黄豆中的一种或两种以上的组合。