[发明专利]一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法

权利要求书

1.一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：其包括以下步骤：

 1）制备五叶松提取液：

将五叶松的根、茎、叶粉碎至粒径35~60μm，混合均匀后溶解于浓度20%的酒精中进行超声波破碎处理，破坏其细胞壁，使得五叶松脂溶出，所述超声波破碎条件为温度25-30℃，时间20-25min；超声破碎后再经过超临界流体萃取，提取五叶松脂，所述超临界流体萃取具体为：以液态二氧化碳为溶剂，在压力4000-5000psi下萃取30-35min，得到不同pH的五叶松提取液；

其中，根：茎：叶的比例为93-95：4-6：1时，得到pH=5.5的五叶松提取液；

根：茎：叶的比例为45-50：35-40：15时，得到pH=6.0的五叶松提取液；

根：茎：叶的比例为38-40：30-32：30时，得到pH=6.5的五叶松提取液；

2）牛樟芝菌繁殖及活化 

切取外围完整厚实的牛樟芝菌丝做为菌种，接入液体培养基中，于25-30℃下培养13-15天，形成牛樟芝菌丝球，完成菌丝活化；所述培养过程，控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%；

3) 初发酵

将步骤2）形成的牛樟芝菌丝球移至pH=5.5的谷类培养基进行初发酵，并接上pH值自动感应器，当环境pH值低于5时，自动添加pH=6.0的五叶松提取液，待牛樟芝子实体直径大于10cm时，自动添加pH=6.5的五叶松提取液；同时，所述初发酵过程，采用震荡发酵，震荡速度为150-200r/min，温度28-30℃，同时控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，发酵3-5天；

其中，所述谷类培养基的制备方法如下：将谷类高温灭菌后与马铃薯葡萄糖琼脂培养基混合均匀，放置冷却成型，即为谷类培养基；        

4) 后发酵

初发酵3-5天后，将牛樟芝菌移植到新的谷类培养基进行后发酵，所述后发酵过程，当环境pH值低于5时，自动添加pH=5.5的五叶松提取液，同时，控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，发酵40-45天以上。

2.根据权利要求1所述的一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：所述五叶松的根、茎、叶在温度5~10℃，真空条件下进行粉碎。

3.根据权利要求1所述的一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：所述步骤2）形成的牛樟芝菌丝球直径为0.5-1.0cm。

4.根据权利要求1所述的一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：所述步骤2) 中的液体培养基是指含蛋白胨及葡萄糖含量分別为5-7%和10-12%的营养液。

5.根据权利要求1所述的一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：所述谷类是指玉米、小麦、薏仁、糙米、黑芝麻、荞麦、绿豆、黄豆中的一种或两种以上的组合。