[发明专利]一种提高棉花转基因效率的方法

权利要求书

1.一种提高棉花转基因效率的方法，其特征在于，所述方法含有以下步骤：

a.采用农杆菌介导法将含有目的基因的植物表达载体侵染棉花无菌苗茎尖，将侵染后的棉花茎尖置于共培养培养基上进行共培养；

b.共培养后，将棉花茎尖转入筛选培养基上培养；

所述共培养培养基与筛选培养基中均含有浓度为0.3mg/L的激动素和浓度为0.2mg/L的吲哚-3-乙酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，侵染后的棉花茎尖置于共培养培养基上在21℃下暗培养48小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，共培养后将棉花茎尖转入筛选培养基上培养12-15d后，将生根和叶片正常的植株转入生根培养基。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述棉花无菌苗茎尖的培养方法为：将棉籽剥壳后露出棉仁，在无菌环境中用75％的酒精消毒1min，0.1％升汞消毒12min，再用无菌水清洗3-4次后，加入无菌水置于100rpm摇床中28℃培养至吸胀露白，置于种苗培养基上，28℃下暗培养2-3d后，将棉花无菌苗去掉子叶及叶原基，露出生长点并用解剖刀划伤生长点，留取子叶下部约0.5～1.0cm部分成为棉花无菌苗茎尖。

5.一种提高棉花转基因效率的共培养培养基，其特征在于，所述共培养培养基含有0.3mg/L激动素和0.2mg/L吲哚-3-乙酸。

6.根据权利要求5所述的共培养培养基，其特征在于，所述共培养培养基含有MSB₅、200μM乙酰丁香酮、30g/L葡萄糖和2.4g/L植物凝胶。

7.一种提高棉花转基因效率的筛选培养基，其特征在于，所述筛选培养基含有0.3mg/L激动素和0.2mg/L吲哚-3-乙酸。

8.根据权利要求7所述的筛选培养基，其特征在于，所述筛选培养基含有MSB₅、200mg/L头孢霉素、80mg/L卡那霉素、15g/L葡萄糖、15g/L蔗糖、2.4g/L植物凝胶。

9.权利要求5或6所述的共培养培养基在提高棉花转基因效率中的应用。

10.权利要求7或8所述的筛选培养基在提高棉花转基因效率中的应用。