[发明专利]提高机体糖原储备的牦牛皮大分子胶原蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶原蛋白的制备方法，尤其涉及提高机体糖原储备的牦牛皮大分子胶原蛋白的制备方法。

背景技术

糖原是由多个葡萄糖组成的大分子多糖，是体内糖的贮存形式，主要贮存在肌肉和肝脏中，在肌肉中约占1~2%，肝脏中约占6~8%。

肌糖原酵解后可提供组织能量，能够满足活动时肌肉对能量需要，特点是释放能量时不需要氧参与，在高海拔缺氧条件下或无氧条件下均可以及时提供机体需要的能量，肌糖原储备与缺氧、疲劳密切相关。肝糖原是葡萄糖聚合物以糖原的形式储存于肝脏，当机体需要时，可分解成葡萄糖，转化为能量。肝糖原和肌糖原都可以调理血糖，不同的是肝糖原分解直接变成葡萄糖，维持血糖均衡，而肌糖原需由肝脏转换成肝糖原后在分解变成葡萄糖。

牦牛是中国古老而又原始的牛种之一，是唯一能在青藏高原生态环境下生存繁衍的牛种，是青藏高原特有的优势畜种，具有独特的生态学特性及经济价值。经过千百年的自然选择与进化，形成了其独特的遗传性能和对高寒缺氧恶劣环境的适应能力，具有极强的抗逆能力、抗病能力、耐受性和适应性，能适应一般家畜不能适应的高海拔、高缺氧等严酷的高寒恶劣生态环境。牦牛体内含有许多抗疲劳、抗缺氧的生物活性物质，从牦牛皮中提取纯天然的胶原蛋白，提供人体能量储备很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种方法简单、效果显著的提高机体糖原储备的牦牛皮大分子胶原蛋白的制备方法。

为解决上述问题，本发明所述的提高机体糖原储备的牦牛皮大分子胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：

⑴将新鲜或经浸润、软化后的干燥的青藏高原特有牛种牦牛wild yak 的牦牛皮清洗干净，放入pH值为4~9的水溶液中，然后加入质量浓度为0.1~20%的酶，在温度为10~50℃的条件下酶解2~20小时，得到保毛脱毛后的牦牛皮；

⑵将所述保毛脱毛后的牦牛皮按其重量的2~5倍加入水，并在温度为30~80℃的条件下加热1~30分钟后，用清水冲洗2~3次，洗净残余毛屑，得到灭酶后的牦牛皮；

⑶将所述灭酶后的牦牛皮剪切成3~5cm的小块，然后加入其重量5~20倍的水进行提取，提取时间为2~10小时后，过滤，弃去残渣，得到滤液；

⑷将所述滤液浓缩至比重为1：1.2~1.5时，加入温度为0~10℃凉水，提沫，并重复3~8次，得到除沫后的滤液；

⑸将所述除沫后的滤液用其体积的5~50倍水稀释后，在分离温度为30~50℃的条件下进行分离，即得14~25Kda大分子的牦牛皮胶原蛋白溶液；

⑹将所述14~25Kda大分子的牦牛皮胶原蛋白溶液经浓缩、干燥，即得牦牛皮大分子胶原蛋白。

所述步骤⑴中酶为木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或两种。

所述步骤⑸中的滤液分离为离心、膜分离、透析方法中的任意一种。

所述步骤⑹中的浓缩是指减压浓缩、吹干浓缩方法中任意一种。

所述步骤⑹中的干燥条件为喷雾干燥、冷冻干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一种。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明以牦牛皮为原料，通过酶法保毛脱毛处理牦牛皮，经过提取分离得到大分子胶原蛋白。采用该方法制得的牦牛皮胶原蛋白分子量分布集中，其分子量在14~25 KDa ，粒径大小在5.8~8 nm 之间，含量大于98%以上（参见表1、表2、图1、图2）。

表1   牦牛皮胶原DLS动态光散射测定结果

注：Item为对同一批样品进行测定次数。

表2  牦牛皮胶原不同粒径峰值分布

2、对本发明所得的牦牛皮大分子胶原蛋白进行药效学实验：

⑴动物负重游泳实验结果：

选两个给药剂量（200 mg/kg/d、1.0 g/kg/d）组进行，将健康KM小鼠30只随机分成3组，雌雄各半，空白组按0.2 ml/10 g灌胃纯净水，连续给药七天。给药前后小鼠的体重、力竭游泳时间进行了比较分析，观察不同给药剂量小鼠力竭游泳时间及体重的影响（参见表3）。

表3不同给药剂量对小鼠负重游泳实验的影响

与空白组比较：*P<0.05；**P<0.01。

⑵生化指标测定：

将健康KM小鼠30只，随机分成3组，雌雄各半，两个给药组（低、高）、空白对照组，给药七天。检测总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LA）、肝糖元、肌糖元的含量（参见表4）。