[发明专利]一种提高栖热菌海藻糖合成酶含量的方法

权利要求书

1.一种提高栖热菌海藻糖合成酶含量的方法，其特征是，步骤如下：

（1）从试管斜面上挑取1-2环栖热菌菌株接种到液体种子培养基中，在65～70℃、100～150r/min下培养12～16h，制得活化后的液体种子，然后将液体种子按体积比3%～5%的接种量接种到液体培养基中，在60～70℃、150～200r/min下培养20～24h，制得菌株细胞培养液；

（2）将菌株细胞培养液置于压力反应器内，在0.5～2.0MPa压力下发酵1～6h，发酵条件为60～70℃、150～200r/min，制得发酵液；

（3）将发酵液离心，收集菌体细胞，破碎细胞，制得细胞破碎液，然后将细胞破碎液采用双水相萃取体系制备海藻糖合成酶。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的栖热菌菌株为水生栖热菌（Thermos aquatics ）ATCC33923或栖热菌属菌(Thermos sp.) ATCC 43815。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的液体种子培养基的组分为：葡萄糖10g/L，酵母膏10g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，pH7.5，蒸馏水1000mL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的液体培养基的组分为：葡萄糖20g/L，麦芽糖5～10g/L，酵母膏5g/L，蛋白胨5g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 1g/L，pH7.5，蒸馏水1000mL。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的采用双水相萃取体系制备海藻糖合成酶的步骤如下：向细胞破碎液中加入硫酸铵和分子量为2000的聚乙二醇，在总体系中使硫酸铵的质量百分比浓度为8wt%～10wt%、聚乙二醇的质量百分比浓度为10wt%～12wt%，混合均匀，静置分相，制得硫酸铵下相溶液和含有海藻糖合成酶的聚乙二醇上相溶液；向聚乙二醇上相溶液中加入硫酸铵，使硫酸铵在总体系中的质量百分比浓度为5wt%～6wt%，调节溶液的pH值为7.0～8.0，混合均匀，静置分相，制得含有海藻糖合成酶的硫酸铵下相溶液和聚乙二醇上相溶液；将制得的硫酸铵下相溶液，采用超滤膜过滤浓缩，收集截留液，冷冻干燥，制得海藻糖合成酶。