[发明专利]提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，属于生物技术领域，具体地说是属于有毒大型真菌室内培养范畴。

背景技术

鹅膏菌属（Amanita）隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、鹅膏菌科（Amanitaceae），是有毒的大型真菌中较特殊、较有价值的一个世界性广布大属，其物种多样性是非常丰富的。全球已报道近400种，中国已记录的近100种（含亚种、变种及变型）。据考证，目前中国仍有不少种尚未研究和命名。但是如今随着全球生态危机的出现，我国的许多大型真菌资源已告危，处于严重衰退及濒危状态，而部份种面临着可能还没有被人类认识或发现其价值时，就已灭绝的风险。

鹅膏菌属中的大部份种属于著名剧毒菌，据知，因误食野生蕈菌中毒死亡者95%是因鹅膏菌所致。科学家们对鹅膏菌真正感兴趣的是其毒性，因此，大约在140年前，人们就开始了鹅膏菌毒素的研究。鹅膏菌毒素可分为四类，其中最主要也是最重要的是肽类毒素，肽类毒素又包括鹅膏毒肽（amatoxins）、鬼笔毒肽（phallotoxins）和毒伞素类（virotoxins）三种，鹅膏毒肽是一类双环八肽，已分离纯化的天然鹅膏毒肽有9种。

鹅膏毒素的应用研究主要体现在以下几方面：①可用于研究真核生物基因的表达、调控及细胞定位，因鹅膏毒肽对真核生物RNA聚合酶Ⅱ的活性有专一性抑制作用；②可开发抗菌、抗病毒特效新药，已证明，疱疹病毒、腺病毒、12猿病毒、禽支气管炎病毒等对amatoxins很敏感；③可筛选抗肿瘤药物，已报道了α-鹅膏毒肽的抗肿瘤活性；④可开发镇静、麻醉及其它特效药，西伯利亚、印度、日本、美国等报道将毒蝇伞作为梦幻剂、镇静或麻醉药、安眠药等；⑤可用于生物防冶等，鹅膏子实体对典型农作物害虫有明显的杀灭及抑制活性。

目前导致鹅膏难以开发及可持续性利用的主要瓶颈问题有：①鹅膏资源珍稀，其种群小，个体少，产量低，分布数量极其有限，加之对生境敏感，一旦生境受到破坏，极易消失或灭绝，属于特殊的致危生物类群，这增加了其进一步被研究、利用的难度；②鹅膏菌属，大多属于外生菌根真菌，目前尚不能人工栽培，其绝大部份种仍属于自然界中难培养或未能培养的微生物，难以人工、半人工栽培，虽然已有少数的种能进行菌丝的纯培养，但也存在一些问题，如菌丝生长缓慢、菌丝中毒素含量不高；③鹅膏多肽毒素，是一种由7-8个被修饰了的稀有氨基酸组成的环肽，可能不是基因编码的直接产物，而是经过加工后的次级产物，要克隆毒素的基因是复杂而困难的；④目前毒素的化学合成品几乎没有活性。因此，至今国内外还没有一种能规模化开发的毒素产品，现作为生化试剂的肽类毒素依然价格昂贵（10多年前每克在10万美元左右 — 陈作红等，1999），难以满足科研和应用所需。

本发明在小豹斑鹅膏纯培养技术有明显突破的基础上，对培养菌丝毒素产量低的问题进行了重点研究和攻关，使菌丝体的鹅膏毒肽产量明显提高，为鹅膏毒素的可持续性开发利用等奠定了重要基础。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种简单、易实现、成本不高，能使鹅膏菌丝体产毒能力明显增强的方法。

本发明的技术任务是，结合培养方式的改变及特殊物质的添加，以共同提高菌丝体的产毒能力，主要按以下方式实现：将经过固体培养诱导并扩繁的菌丝体，转入液体培养，在液体培养阶段，培养基中同时加入复合氨基酸及微量的子实体干粉，可使菌丝体的产毒能力提高5.5～7.2倍；