[发明专利]提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法

权利要求书

1.一种提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，其特征为，将经过固体培养诱导并扩繁的菌丝体，转入液体培养，在液体培养阶段，培养基中同时加入复合氨基酸及微量的子实体干粉，培养25～28天，菌丝产生的α-鹅膏毒肽总量为2330～3015μg/g._干重，为固体培养时的5.5～7.2倍。

2.根据权利要求1所述的提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，其特征为，菌丝体的诱导及扩繁方法如下：在云南武定狮子山，采摘生长健状、未完全开伞的幼嫩子实体；取菌盖与菌柄交接处的内部无菌组织块约0.3cm²大小，嵌入诱导培养基，所述培养基成分为：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂ 1.00g/L、KH₂PO₄ 0.50g/L、NH₄NO₃ 0.35g/L、KNO₃ 0.35g/L、维生素B₁ 0.10mg/L、16.0波美的麦芽汁180ml、琼脂10.00g/L，控制培养基PH值为5.6，在23～24℃下暗培养40～45天，组织块隆起，表面长出团状、稠密的绒毛状白色菌丝；将菌丝在固体扩大培养基中扩繁8～10代，每代培养48～55天后，扩繁的菌丝及培养基中α-鹅膏毒肽总含量平均为420±25μg/g._干重，其所述的扩大培养基成分为：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂ 1.00g/L、KH₂PO₄ 0.50g/L、腐熟滇青冈叶子粉40～50g/L、16.0波美的麦芽汁180ml、琼脂10.00g/L，控制培养基PH值为5.6。

3.根据权利要求2所述的菌丝体扩大培养方法，其特征为，扩大培养基中，腐熟滇青冈叶子粉的制备方法如下：在武定狮子山收集滇青冈叶子，带回实验用地，按4：1～5：1的比例与猪粪拌匀，按叶子重量的0.5～1.0%加入尿素，混匀，加水至叶子湿透，上面覆盖遮阴网，前1个月每隔4～5天揭开遮阴网，里外翻匀，加水湿透，然后再静止发酵2～3个月，其间，看情况10～15天补水一次，90～120天后，将已腐熟的叶子摊开，晒干，粉碎，过80目分样筛即可。

4.根据权利要求1所述的提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，其特征为，液体培养方法如下：将经过固体平板培养的菌丝体，用直径为6mm的无菌打孔器，无菌条件下切取菌片，转入含100ml液体培养基的250ml三角瓶中，每瓶接种6块，置于转速为150r/min、温度为24℃的摇床上培养，其所述的液体培养基成分为：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂ 1.00g/L、KH₂PO₄ 0.50g/L、腐熟滇青冈叶子粉水提液200～250 ml/L、16.0波美的麦芽汁180ml，控制培养基PH值为5.6，其中，腐熟滇青冈叶子粉水提液的制备方法如下：取权利要求3中的腐熟滇青冈叶子粉100g，加入800～1000ml蒸馏水，加热煮沸1～1.5hr，过滤，滤液加热浓缩成200～250ml。

5.根据权利要求1所述的提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，其特征为，所述的复合氨基酸组成为谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸，四种氨基酸的加入量分别为谷氨酸0.40～0.60g/L，甘氨酸1.00～1.20g/L，丙氨酸1.00～1.20g/L，异亮氨酸0.50～0.60g/L。

6.根据权利要求1所述的提高小豹斑鹅膏菌丝体产毒能力的方法，其特征为，子实体干粉的加入方法如下：将小豹斑鹅膏子实体在50～60℃下烘干，粉碎，过120目分样筛，按0.005～0.008g/L的量加入到液体培养基中。