[发明专利]一种提高乳酸菌胆盐耐受能力的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种提高乳酸菌耐受能力的方法，具体的说是一种提高乳酸菌胆盐耐受能力的方法。

背景技术：

乳酸菌是一类能发酵糖类经厌氧代谢主要产物为乳酸的一类细菌的总称，主要有乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、片球菌属和乳球菌属。乳酸菌是益生菌的主要来源，很多乳酸菌都具有潜在益生功能，它们可以维持肠道微生态平衡，促进机体健康，已报道的益生功能有缓解腹泻症状、降低胆固醇，改善肝脏功能，增强免疫功能，延缓衰老等。具有潜在益生功能的乳酸菌发挥益生功能的前提是：必须能够以存活的状态通过人体胃肠道。因此，常规益生菌筛选方法通过体外胆盐耐受实验淘汰胆盐耐受能力低的乳酸菌。在这一筛选淘汰过程中，必然会损失部分具有优良益生功能的菌株，造成生物资源浪费。另外，胆盐耐受能力强的益生菌在通过胃肠道时依然要损失一定的活菌数，影响益生功能效价。因此，开发提高乳酸菌胆盐耐受能力的方法既是发掘生物资源的需要，也是提高功能效价的途径。然而，在现有食品生产应用中，除微胶囊技术外，尚无有效的乳酸菌耐胆盐保护方法。而乳酸菌微胶囊的添加，需对常规生产工艺进行改进和革新，还需增加对食品级壁材的安全性评价。该技术应用所带来的生产成本增加，限制了其在食品生产领域的应用。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种可提高乳酸菌胆盐耐受能力的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

在常规乳酸菌液体培养基体系中添加大豆磷脂，所述大豆磷脂在液体培养基中的添加量为0.2%-0.6%（w/v）。乳酸菌培养体系为固体或粉末体系时，大豆磷脂添加量为0.6%。

该方法可应用于提高乳杆菌属和乳球菌属的乳酸菌胆盐耐受能力，且菌体生长良好并不发生菌种变化；在发酵液态乳原料体系中添加食品级大豆磷脂，所述食品级大豆磷脂在液态乳原料中添加量为0.2%-0.4%（w/v），优选0.4%。该方法可提高发酵乳制品中乳酸菌的胆盐耐受能力，且不影响产品原有风味、口感，甚至可以改善产品质构。

本发明所具有的优点：

本发明通过在培养体系中添加0.2%-0.6%的大豆磷脂，可以提高乳酸菌通过人体胃肠道时对胆盐的耐受能力，增加存活率。此外，食品级大豆磷脂是《GB2760-211食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中允许、“按生产需要适量使用”的食品添加剂，该发明可直接应用于乳酸菌发酵乳制品生产中，添加工艺简单，原辅料成本低廉、易于推广应用。

具体实施方式

实施例1

(1)培养体系制备

所述培养体系为常规乳杆菌培养基MRS液体肉汤，添加大豆磷脂后115℃灭菌20分钟。所述大豆磷脂添加量为0.6%（w/v），来自北京鸿瑞嘉盛公司。

(2)乳酸菌菌种及培养

所述乳酸菌菌种为植物乳杆菌N13，常规乳酸菌培养方法活化后接种至添加有0.6%大豆磷脂的MRS肉汤培养基中，接种量为2%（v/v），37℃厌氧培养24h。

(3)菌体胆盐耐受能力测试

离心收集培养完成的菌体，离心条件为8000g，10min。将收集的菌体重悬于含有0.3%（w/v）胆盐的MRS肉汤培养基中室温处理60min。倾注平板法计数处理前后的活菌数，并计算存活率。存活率=Lg(N_t)/Lg(N₀)×100%，（N_t为胆盐处理60min后每毫升菌液含活菌数量，N₀为胆盐处理前每毫升菌液含活菌数量）。另外，以未添加大豆磷脂的MRS肉汤培养体系作为对照组，计算对照组菌体胆盐处理存活率。

(4)测试结果

实验组（MRS+大豆磷脂）培养完成后菌体浓度为6.78×10⁸cfu/ml，对照组（MRS）培养完成后菌体浓度为6.52×10⁸cfu/ml，实验组与对照组培养效果相近，表明在MRS液体肉汤中添加0.6%大豆磷脂并未影响菌体生长。

实验组菌体在0.3%胆盐中处理60min后存活率为67.5%，而对照组菌体存活率为20.9%，由此可见，在MRS肉汤培养体系中添加0.6%大豆磷脂，植物乳杆菌N13的菌体胆盐耐受能力得到了显著提高。

实施例2

1.培养体系制备

所述培养体系为常规乳球菌培养基M17液体肉汤，添加大豆磷脂后115℃灭菌20分钟。所述大豆磷脂添加量为0.6%（w/v），来自北京鸿瑞嘉盛公司。

2.乳酸菌菌种及培养