[发明专利]用于提高体外培养人肝细胞的生理性CYP3A4表达的嵌合基因及其构建方法有效
| 申请号： | 201310282063.6 | 申请日： | 2013-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN103421831A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 汪艳;饶小惠;潘明新;陈锋 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学珠江医院 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京市立方律师事务所 11330 | 代理人： | 刘延喜;王增鑫 |
| 地址： | 510282 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 提高 体外 培养 肝细胞 生理 cyp3a4 表达 嵌合 基因 及其 构建 方法 | ||
1.一种用于提高体外培养人肝细胞的生理性CYP3A4表达的嵌合基因，其特征在于：其序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示。
2.一种重组真核表达载体，其特征在于，其包含如权利要求1所述的嵌合基因。
3.如权利要求2所述的重组真核表达载体，其特征在于：所述的真核表达载体为哺乳动物细胞表达载体。
4.如权利要求3所述的重组真核表达载体，其特征在于：所述哺乳动物细胞表达载体为PCI-neo哺乳动物表达载体。
5.如权利要求4所述的重组真核表达载体，其特征在于：所述PCI-neo哺乳动物表达载体包括人类巨细胞病毒早期增强子/启动子序列及其下游的依次的β-globin/IgG嵌合内含子序列和SV40Late poly(A)信号序列。
6.如权利要求5所述的重组真核表达载体，其特征在于：所述PCI-neo哺乳动物表达载体的β-globin/IgG嵌合内含子序列和SV40Late poly(A)信号序列之间包含如下酶切位点：Nhe Ⅰ、Xho Ⅰ、EcoR Ⅰ、Mlu Ⅰ、Xba Ⅰ、Sal Ⅰ、Acc Ⅰ、Sma Ⅰ和Not Ⅰ。
7.一种如权利要求2-6任意一项所述的重组真核表达载体的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：
（1）根据GenBank数据库收录的正常人原代肝细胞来源的cDNA克隆人核因子孕烷X受体基因全长序列；
（2）根据GenBank数据库收录的cDNA序列克隆野生型P53基因的激活域序列；
（3）将所述步骤（1）和（2）获得的两段序列构建成序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示的嵌合基因，并且定向克隆到PCI-neo哺乳动物表达载体的β-globin/IgG嵌合内含子序列和SV40Late poly(A)信号序列之间，获得重组真核表达载体。
8.如权利要求7所述的重组真核表达载体的构建方法，其特征在于：所述人核因子孕烷X受体基因全长序列和野生型P53基因的激活域序列定向插入到所述PCI-neo哺乳动物表达载体的Nhe Ⅰ、Xho Ⅰ、EcoR Ⅰ、Mlu Ⅰ、Xba Ⅰ、Sal Ⅰ、Acc Ⅰ、Sma Ⅰ和Not Ⅰ任意一个酶切位点上。
9.如权利要求7所述的重组真核表达载体的构建方法，其特征在于：所述获得的重组真核表达载体通过限制性酶切图谱法和/或测定其核苷酸序列来进行筛选和鉴定。
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