[发明专利]一种提高乳酸乳球菌抵御冷冻胁迫的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高乳酸乳球菌抵御冷冻胁迫的方法，属乳酸菌冷冻保护技术领域。

背景技术

乳酸菌是工业生产菌株中的一个庞大种群，大量的乳酸菌被应用于生产食品、化学助剂和其它生物制品。随着人们对食品、药品保健功能要求的不断提高，迫切需要获得具有旺盛生命力的乳酸菌在被人体摄入后仍然能够发挥其特有的保健益生作用。然而，乳酸菌的最适生长温度一般在30 -37°C，在实际生产过程中，由于起酵物的冷冻保藏、低温育培和发酵产品的冷藏，使乳酸菌不得不置身于远远低于其自身最适生长温度的环境中。生产和生活中对高活性乳酸菌的需求使乳酸菌抵御冷冻胁迫的研究成为焦点。

酸面团是指利用大量微生物在面糊中的自然发酵作用而制作的面团，俗称酵头。乳酸菌是酸面团发酵的主要生产菌株。由于酸面团的储存和运输温度为4°C，因此，选取了这个实际生产中应用较为普遍的温度作为冷冻胁迫的处理条件。在冷冻环境中，微生物细胞将产生一系列的生理功能紊乱。然而，对提高微生物细胞冷冻抗性的策略研究还十分有限，目前主要通过添加部分冷冻保护剂如海藻糖、甘油等减少冷冻过程中对细胞造成的机械损伤。因此，寻找能够提高乳酸菌冷冻胁迫抗性的外源保护剂具有重要的研究意义。

已有研究发现谷胱甘肽（glutathione，GSH）能提高乳酸菌抵御冷冻胁迫，但GSH价格昂贵限制了其应用。本发明自制蚕蛹多肽（Silkworm pupa peptides，SPP）是以干蚕蛹索氏抽提油脂得蚕蛹蛋白(蛋白含量94%)酶解后冷冻干燥所得。因此，本申请专利首次将蚕蛹多肽应用于乳酸菌冷冻保护中具有重要的实际应用价值和经济价值。

发明内容

本发明涉及一种提高乳酸乳球菌抵御冷冻胁迫的方法。这种方法有效地提高了乳酸乳球菌存活率，可广泛用于乳酸菌及其他微生物的冷冻保藏。

为达到上述目的，发明采用如下技术方案：

将5%接种量的乳酸乳球菌SK11转接新鲜M17培养基（胰蛋白胨5.0g、鱼蛋白胨5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母浸膏2.5 g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、甘油10.0g、乳糖3.0g、磷酸氢二钾5.0g、琼脂30.0 g、蒸溜水lL，另加1%的葡萄糖），30^oC静置培养至6h（对数生长中期）后添加16g/L蚕蛹多肽(SPP)，生长至12h（稳定中后期）收集发酵液。细胞经生理盐水洗涤两次后，重悬于等体积添加16g/L蚕蛹多肽(SPP)的M17培养基中，并置于4^oC下进行冷冻胁迫。

本发明工艺简单、操作易行，4℃冷冻胁迫30天后，乳酸乳球菌SK11存活率是空白对照的9.36倍。

附图说明

图1 冷冻胁迫初期添加不同浓度SPP对乳酸乳球菌SK11冷冻抗性的影响。

图2不同前培养时期添加SPP对乳酸乳球菌SK11冷冻抗性的影响。

图3前培养耦合冷冻胁迫初期共同添加SPP对乳酸乳球菌SK11冷冻抗性的影响。

具体实施方式

实施例：本发明涉及一种提高乳酸乳球菌抵御冷冻胁迫的方法，其特征在于具有如下的过程：将5%接种量的乳酸乳球菌SK11转接新鲜M17培养基，30℃静置培养至6h（对数生长中期）后添加16g/L蚕蛹多肽，生长至12h（稳定中后期）收集发酵液。细胞经生理盐水洗涤两次后，重悬于等体积添加16g/L蚕蛹多肽的M17培养基中，并置于4℃下进行冷冻胁迫, 30d后乳酸乳球菌SK11存活率是空白对照的9.36倍；所述的M17培养基的组成为：胰蛋白胨5.0g、鱼蛋白胨5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母浸膏2.5 g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、甘油10.0g、乳糖3.0g、磷酸氢二钾5.0g、琼脂30.0 g、蒸溜水lL，另加1%的葡萄糖。

有关本发明的实验

以下将结合实施实例形式，对本发明的上述内容作进一步说明。

实验一 冷冻胁迫初期添加不同浓度SPP（蚕蛹多肽）对乳酸乳球菌冷冻抗性的影响