[发明专利]白细胞的分类计数方法、白细胞分类试剂盒及白细胞分类试剂

说明书

【技术领域】

本发明涉及分类计数活体样品中的白细胞的方法。本发明还步及用于分类计数活体样品中的白细胞的白细胞分类试剂盒及白细胞分类试剂。

【背景技术】

正常的白细胞通常被分类为淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及嗜碱性粒细胞的5种。在正常的末梢血中，这些的血细胞各自以一定的比例存在。但是，当受试者存在疾病时，特定的血细胞数增加或减少。所以，在临床检查的领域，通过进行白细胞的分类计数，可得对疾病的诊断极其有用的信息。

在造血器肿瘤、病毒感染症等的疾病中，出现在正常的末梢血液中不存在的细胞。例如，在急性的白血病中，在末梢血液中出现作为未成熟的白细胞的“母细胞（成髓细胞：myeloblast、成淋巴细胞：lymphoblast）”。另一方面，在病毒感染症、药物过敏等中，由抗原刺激而在末梢血液中出现作为活化的淋巴细胞的非典型淋巴细胞（atypical lymphocyte）。从末梢血液中区别检测非典型淋巴细胞和母细胞，在进行疾病的筛选或诊断中极其有用。

近年、市售应用流式细胞术的原理的各种的自动血细胞计数装置。由那样的装置，可自动进行样品中的血细胞的分类计数。另外，用于由自动血细胞计数装置的测定的血细胞分类试剂也有市售。使用这样的试剂用自动血细胞计数装置测定待测样品，在各自散点图上的指定的区域出现检测的各血细胞的信号。

所述技术中多少知道如上述一样的血细胞分类试剂。例如，在专利文献1中记载了可分类计数异常白细胞和正常白细胞的两方的方法。在该方法中，使用将特异性地染色RNA的染色液，和含阳离子性表面活性剂及非离子性表面活性剂的溶血剂组合而成的试剂盒。另外，在专利文献2记载了分类计数正常白细胞，并且检测异常白细胞的方法。在该方法中，使用包含含有指定的荧光染料的染色液，和含阳离子性表面活性剂及非离子性表面活性剂的溶血剂的试剂。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1:专利第4248017号公报

专利文献2:美国专利申请第2009/0023129号

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

如上所述，在从受试者得到的待测样品中，有除了正常白细胞之外，还包含母细胞及非典型淋巴细胞等异常白细胞的情况。

但是，在使用专利文献1及专利文献2的试剂的方法中，作为异常白细胞的母细胞及非典型淋巴细胞的信号均出现在散点图上的大致相同的区域，所以有难以区别检测母细胞和非典型淋巴细胞的情况。

本发明以提供可分类计数正常白细胞，并且能区别检测母细胞和非典型淋巴细胞的白细胞的分类计数方法作为目的。本发明另外，以提供可分类计数正常白细胞，并且能区别检测母细胞和非典型淋巴细胞的白细胞分类试剂盒及白细胞分类试剂作为目的。

【解决课题的技术方案】

在由使用以往的白细胞分类试剂的流式细胞仪的测定中，母细胞及非典型淋巴细胞的信号在散点图上出现在出现正常淋巴细胞及正常单核细胞的信号的区域的近边或与该区域重复的区域。本发明人考虑了，是否通过将出现正常淋巴细胞的信号的区域和出现正常单核细胞的信号的区域隔开，可分离异常白细胞的信号和正常白细胞的信号，从而可提高异常白细胞的检测灵敏度。

从而，本发明人对于能隔开出现正常淋巴细胞的信号的区域和出现正常单核细胞的信号的区域的白细胞分类方法进行检查。结果，令人惊讶地发现，通过使芳香族的有机酸的浓度和试剂的pH成为指定的组合，能提高异常白细胞的检测精度，区别检测母细胞和非典型淋巴细胞，从而完成本发明。

即，本发明提供白细胞的分类计数方法，其包括：

将活体样品，染色核酸的第1试剂，用于使红细胞溶血，给白细胞的细胞膜造成能透过上述荧光染料的程度的损伤的阳离子性表面活性剂及非离子性表面活性剂，以及含有20mM以上50mM以下的浓度的芳香族的有机酸的第2试剂混合而制备测定样品的步骤；

向制备的测定样品照射光，取得这时发生的散射光信息及荧光信息的步骤；及

基于取得到的散射光信息及荧光信息，将上述活体样品中的白细胞分类，同时区别检测母细胞和非典型淋巴细胞的步骤；

其中，

当上述第2试剂中的芳香族的有机酸的浓度是20mM以上、不足30mM时，上述第2试剂的pH是5.5以上6.4以下，

当上述第2试剂中的芳香族的有机酸的浓度是30mM以上50mM以下时，上述第2试剂的pH是5.5以上7.0以下。