[发明专利]提高维生素K依赖性蛋白质的表达产量的方法

权利要求书

1.用于对表达一种或多种维生素K依赖性蛋白质的真核细胞进行发酵的方法，其中在所述发酵方法之前和/或过程中将选自：

i)维生素K的还原形式和/或

ii)维生素K类似物的还原形式和/或

iii)维生素K前体的还原形式

之中的一种或多种化合物加入细胞培养基。

2.权利要求1的方法，其中所述维生素K依赖性凝血因子选自FIX、FVII、FX、FII、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、骨钙素、抑制钙化的基质Gla蛋白(MGP)或调节细胞生长的生长抑制特异性基因6蛋白(Gas6)。

3.权利要求2的方法，其中所述维生素K依赖性凝血因子为FIX或FVII。

4.权利要求1至3的方法，其中所述还原的维生素K类似物是还原型甲萘醌亚硫酸氢盐。

5.权利要求1至4的方法，其中在生物反应器中进行所述表达。

6.权利要求1至5的方法，其中以充排模式进行所述发酵。

7.权利要求1至5的方法，其中以分批模式进行所述发酵。

8.权利要求1至5的方法，其中以灌注模式进行所述发酵。

9.权利要求1至8的方法，其中，使用悬浮的细胞进行所述发酵。

10.权利要求1至8的方法，其中利用贴壁细胞进行所述发酵。

11.一种或多种选自下述中的化合物的用途：

i)维生素K的还原形式，和/或

ii)维生素K类似物的还原形式，和/或

iii)维生素K前体的还原形式；

其中所述化合物用于通过将所述化合物加入细胞培养基来在细胞培养物中表达一种或多种功能性维生素K依赖性蛋白质。

12.权利要求11的用途，其中相应的功能性维生素K依赖性蛋白质的表达产率与当将相同量的所述相应维生素K和/或维生素K类似物和/或维生素K前体的非还原形式以与相应还原形式相同的方式加入细胞培养基时获得的所述相同功能性维生素K依赖性蛋白质的表达产率相比较而言得到增加。

13.权利要求11至12的用途，其中所述维生素K依赖性蛋白质的活性与抗原水平表达之间的比率得到增加。

14.权利要求11至13的用途，其中所述维生素K依赖性蛋白质的活性与抗原水平表达之间的比率增加至少15％。

15.权利要求11至14的用途，其中所述维生素K依赖性凝血因子选自FIX、FVII、FX和FII、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、骨钙素、抑制钙化的基质Gla蛋白(MGP)或调节细胞生长的生长抑制特异性基因6蛋白(Gas6)。

16.权利要求11至15的用途，其中所述维生素K依赖性凝血因子是FIX或FVII。

17.权利要求11至16的用途，其中所述还原型维生素K类似物是还原型甲萘醌亚硫酸氢盐。

18.权利要求11至17的用途，其中在生物反应器中进行所述表达。

19.权利要求11至18的用途，其中以充排模式进行所述发酵。

20.用于维生素K依赖性蛋白质的发酵的培养基，其补充有维生素K和/或维生素K类似物和/或维生素K前体的还原形式。

21.权利要求20的培养基，其中补充有还原型甲萘醌亚硫酸氢盐。

22.维生素K和/或维生素K类似物和/或维生素K前体的还原形式在细胞培养基中增强发酵中细胞的存活力的用途。