[发明专利]一种提高细胞酶活性发酵生产1,3丙二醇的方法

权利要求书

1.一种提高酶活性发酵生产1，3-丙二醇的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

(1)菌种的选择：选择克雷伯杆菌作为菌种，先接种到LB培养机进行斜面培养；

(2)LB培养基的配制：按配方比例分别称取下列物质：甘油2831g、蛋白胨0.5-1.5g、酵母膏1.5-2.5g、琼脂粉13-16g、NaCl 18-12g，放入烧杯中，加入1000ml蒸馏水并加热溶解，用NaOH溶液或HCl溶液调整溶液pH至7.0-7.5；然后高温灭菌、搁置斜面，在温度为28-32℃下，培养24-48小时后，转入3-4℃冰箱里保存备用；

(3)种子培养基：在1000ml蒸馏水中，加入酵母膏1.5-2.5g、MgSO4·7H₂O0.15-0.25g、柠檬酸0.40-0.44g、KH₂PO42.5-3.5g，NH₄Cl 1.5-2.5g、CaCl₂0.08-0.12g、甘油28-32kg、无机离子溶液1.5-2.5ml进行混合作为种子培养基；

(4)发酵培养基：在1000ml蒸馏水中，加入酵母膏0.5-1.5g、MgSO₄·7H₂O0.15-0.25g、柠檬酸0.40-0.44g、KH₂PO₄ 0.5-1.5g、NH₄Cl 5.3-5.5g、CaCl₂0.08-0.12g、甘油38-42g、无机离子溶液1.5-2.5ml、MnCl₂0.01-0.012g混合制得发酵培养基；

所述的无机离子溶液为：在1000ml蒸馏水中，加入以下物质配制而成：ZnCl₂0.65-0.70g、MnCl₂10.10-10.20g、H₃BO₃0.05-0.07g、CuCl₂0.45-0.50g、FeCl₃5.2-5.6g、CoCl₂11-15g、(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 0.23-0.27g、3mol/LH₂SO₄18-22ml；

(5)种子制备：取经过斜面培养的克雷伯杆菌适量接入到步骤(3)培养的种子培养基中进行摇床培养，培养液的温度为30～40℃，转速80～110rpm，培养8～15小时，转入二代培养基中，培养0～12小时后加入氨基酸盐和渗透剂，调节pH为7.5～9.0，30～40℃培养5～12小时，制备二级种子备用，要求氨基酸盐和渗透剂的浓度均为0.001-10g/L；

(6)发酵培养、生产1，3-丙二醇：将工业甘油、发酵培养基装入培养容器中，甘油的装入量为培养容器的体积的50～85％，再将步骤(5)培养的二级种子接入到该容器中，接种量为所述容器体积的2～20％，进行摇床培养，培养温度30～40℃，转速80～150rpm培养，待甘油降至一定浓度时补加甘油，发酵0～25h后加入氨基酸盐和渗透剂，氨基酸盐和渗透剂浓度范围均为0.001-10g/L。

2.根据权利要求书1所述的提高细胞酶活性发酵生产1，3丙二醇的方法，其特征在于：步骤(6)所述的氨基酸盐为选自甘氨酸锌、甘氨酸钴、或甘氨酸锰的一种或几种；所述的渗透剂选自LC-SG50氨基酸表面活性剂、硬脂酸聚氧乙烯醚SG中的一种或几种。

3.根据权利要求书1、2所述的提高细胞酶活性发酵生产1，3丙二醇的方法，其特征在于：所述的方法适用于1，3丙二醇的厌氧和有氧发酵过程。