[发明专利]一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法

权利要求书

1.一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法，其特征在于：采用Red系统分别对新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌中的tyrA基因及串联的trpE/trpD基因进行缺失构建；然后将新一代工程质粒MDphe-3植入csrA基因、tyrA基因及串联的trpE/trpD基因缺失的工程宿主菌内以构建新的L-苯丙氨酸基因工程菌；最后对该新的L-苯丙氨酸基因工程菌的遗传稳定性及产酸进行验证。

2.如权利要求1所述一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法，其特征在于：具体包括以下几个步骤：

步骤一：采用Red系统对新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌的tyrA基因进行缺失：

(1)构建新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌的tyrA基因敲除组件；

(2)将Red系统中编码有Red重组酶的pKD46质粒植入csrA基因缺失型工程宿主菌后，把该工程宿主菌制备成高效率的电转化感受态细胞；

(3)将tyrA基因的敲除组件导入本步骤一(2)中的感受态细胞混匀后进行工程宿主菌的复苏操作，并对其进行诱导以丢失pKD46质粒；

(4)对所述工程宿主菌中tyrA基因缺失进行验证及抗性基因的消除；

步骤二：采用Red系统对新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌中串联的trpE/trpD基因进行缺失：

(1)构建新一代工程质粒MDphe-3的csrA基因缺失型工程宿主菌的trpE/trpD基因敲除组件；

(2)将Red系统中编码有Red重组酶的pKD46质粒植入csrA基因缺失型工程宿主菌后，把该工程宿主菌制备成高效率的电转化感受态细胞；

(3)将trpE/trpD基因的敲除组件导入本步骤二(2)中的感受态细胞混匀后进行工程宿主菌的复苏操作，并对其进行诱导以丢失pKD46质粒；

(4)对所述工程宿主菌中trpE/trpD基因缺失进行验证及抗性基因的消 除；

步骤三：将新一代工程质粒MDphe-3植入csrA基因、tyrA基因及串联的trpE/trpD基因均缺失的工程宿主菌中进行表达，以完成新的L-苯丙氨酸基因工程菌的构建；并对该新的L-苯丙氨酸基因工程菌的遗传稳定性及产酸进行验证。

3.如权利要求1所述一种提高L-苯丙氨酸基因工程菌产酸率的方法，其特征在于：所述工程宿主菌为大肠杆菌。