[发明专利]硫酸铵梯度法－薄膜蒸发法制备盐酸小檗碱长循环脂质体的方法

说明书

技术领域

本发明属于智能药物载体技术领域，具体涉及一种综合利用硫酸铵梯度法、薄膜蒸发法制备盐酸小檗碱长循环脂质体的方法。

背景技术

脂质体(liposomes)是由脂质双分子层构成的内部为水相的封闭囊泡。这种由磷脂质双层(phosphocid bilayers)结构组成的脂质体(liposomes)在结构上交替间隔着水层和磷脂质双层，可以包埋亲水性或亲脂性的物质。脂质体作为一种智能药物载体得到越来越多的关注，具有优良的靶向性、生物相容性和提高药物稳定性、治疗指数以及降低药物毒性等优点。脂质体进入人体循环系统后，因血液中的蛋白、调理素等的作用，易发生破裂，包封的药物快速渗漏，被网状内皮组织系统(RES)识别吸收，从而降低了应用价值。于是，人们致力于研究长循环脂质体。通过在脂质体的成分中加入一定比例的糖脂或在磷酸分子上联接含多羟基团的物质(如聚乙二醇PEG)，使脂质体表面暴露出一些亲水性的多羟基基团等方式，减少与血浆中蛋白、调理素的作用，从而增加其在血液中的稳定性。

目前，制备脂质体的方法颇多，传统的成熟的被动载药方法有为薄膜蒸发法、逆相蒸发法、溶剂注入法等。近年来，由于脂质体主动载药的发展，大大改善了被动载药制得的脂质体包封率都不高、包封条件不易掌握、包封率差异较大等缺点；主动载药法特别是用硫酸铵梯度法制备生物碱类药物的脂质体。硫酸铵梯度法是利用硫酸铵水溶液作为水相。当脂质体双分子膜内的硫酸铵浓度远远大于外水相中的硫酸铵浓度时，内水相中的铵离子(NH₄⁺)解离为氨分子(NH₃)。由于NH₃跨膜速率远远大于SO₄^2-，且NH₃和SO₄^2-的渗透系数(P)也有很大的差异，所以当一个NH₃离开脂质体内部时，就会在脂质体的内水相中留下一个H⁺，从而建立起一个硫酸铵梯度，同时产生一个pH梯度，使药物逆硫酸铵梯度载入脂质体，可制备出相对较高包封率的脂质体。

发明内容

本发明的目的是提供一种硫酸铵梯度法结合薄膜蒸发法制备盐酸小檗碱长循环脂质体的方法，此方法是综合利用以上的现有技术，创建的一种新的主动复合被动载药的方法，以制备盐酸小檗碱长循环脂质体。本发明将解决药物载体中存在的两个主要问题：1、提高脂质体药物的包封率；2、提高脂质体药物载体的稳定性。

完成上述任务本发明的技术方案是，硫酸铵梯度法-薄膜蒸发法制备盐酸小檗碱长循环脂质体的方法，步骤如下：

1).将蛋黄卵磷脂(EPC)，以及1/2.5-1/3.5蛋黄卵磷脂质量的胆固醇(CH)，以及1/20-1/5蛋黄卵磷脂质量的聚乙二醇2000(PEG2000)溶于适量无水乙醇中，直至形成黄色透亮溶液；

2).减压回收乙醇，在容器壁形成膜；注入硫酸铵溶液，使得膜材溶解；水化1h～2h；

3).然后以蒸馏水为透析介质，透析15～20h，制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；

4).在空白脂质体中加入盐酸小檗碱溶液；

5).在30℃～60℃孵化10～60分钟；

6).然后取孵化后的溶液，以蒸馏水为透析外液，在4℃～37℃透析12h，透析到外液无色透明；把透析液转移至容量瓶中定容，即可获得包封率高，稳定，粒径均匀的长循环脂质体。

以上所述的无水乙醇的“适量”，是以能够完全溶解为度；

所述的“在30℃～60℃孵化10～60分钟”，推荐采用60℃下孵化10分钟；

所述的硫酸铵溶液的浓度为1.0ml·l^-1～2.5ml·l^-1；可以分别是1.0、1.5、2.0、2.5ml·l^-1；硫酸铵溶液的加入量以膜材完全溶解为度；本申请推荐采用的浓度为2.5ml·l^-1；推荐采用的加入量为25ml硫酸铵溶液/50～500mgEPC；

本申请推荐的透析温度为4℃。

更具体和更优化地说，本发明的综合利用硫酸铵梯度法-薄膜蒸发法制备盐酸小檗碱长循环脂质体的方法，具体操作步骤是：