[发明专利]一种人白细胞介素-2的基因合成、表达质粒的构建及产物的生产工艺

摘要

白细胞介素-2是作为一种免疫药物可用于治疗某些病毒和治疗癌症，有很好的应用前景，临床需要量很大，是国际上竞相开发的产品。本发明是通过构建带有天然白细胞介素-2基因的表达质粒，在大肠杆菌中高效表达，表达量达菌体总蛋白的30—40％。本发明还建立了一种高效的包涵体分离技术和获得高比活的白细胞介素-2纯化方法，这为大量生产白细胞介素-2创造了优越的条件。

主权项

1、一种人白细胞介素-2(IL-2)基因的合成，表达质粒的构建及产物的生产工艺，其特征是：a.使用人工设计、化学合成的基因，基因结构式如下：GAATTCTTATGGCTCCGACTTCTTCTTCTACTAAAAAGACTCAGMetAlaProThrSerSerSerThrLysLysThrGlnCTTCAGCTGGAACATCTGCTGCTGGACCTCCAGATGATCCTGAACLeuGlnLeuGluHisLeuLeuLeuAspLeuGlnMetIleLeuAsnGGTATCAACAACTACAAAAACCCGAAACTGACCCGTATGCTGACCGlyIleAsnAsnTyrLysAsnProLysLeuThrArgMetLeuThrTTCAAATTCTACATGCCGAAAAAAGCTACCGAACTGAAACATCTGPheLysPheTyrMetProLysLysAlaThrGluLeuLysHisLeuCAGTGCCTTGAAGAAGAACTGAAACCGCTGGAAGAAGTTCTGAACGlnCysLeuGluGluGluLeuLysProLeuGluGluValLeuAsnCTGGCTCAGTCTAAAAACTTCCATCTGCGTCCGCGTGACCTGATCLeuAlaGlnSerLysAsnPheHisLeuAreProAreAspLeuIleTCTAACATCAACGTTATCGTTCTGGAACTGAAAGGTTCTGAAACCSerAsnIleAsnValIleValLeuGluLeuLysGlySerGluThrACCTTCATGTGCGAATACGCTGACGAAACCGCTACCATCGTTGAGThrPheMetCysGluTyrAlaAspGluThrAlaThrIleValGluTTCCTGAACCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCTATCATCGTTGAGThrPheMetGluTyrAspGLuThrllEValGluTTCGTGAACGGTTGGATCACCTTCTCCCAGTCTTCTACCPheLeuAsnArgTrpllePheCysGlnSerlleSerThrGTGACCTGATAGGATCCLeuThrTermTermIL-2由133个氨基酸组成，合成的该基因有399bp，加上起始密码子ATG，终止密码子TAG和TGA及5′和3′，末端克隆用的限制性内切酶切点，共有426bp，选用了大肠杆菌使用频率高的密码子，使合成的il-2基因能在大肠杆菌中高效表达，产生大量的人Il-2，而不改变IL-2的氨基酸顺序；(b)将合成的IL-2基因克隆入带有Pl启动子Clt857温控阻遏蛋的基因、核糖体t1t25SrRNA终止信号和MCS区的基因载体PLy4后，构建成IL-2的表达质粒Ply4-SynIL-2，转化大肠杆菌后获得高效表达；(c)表达产物以包涵体的形成存在，得包涵体产物后用8M盐酸胍溶解，上SephacrylS-200柱，一步柱层析可以得到纯度＞95%，经活＞2×106国际单位/毫克的IL-2。