[发明专利]在原核微生物的染色体DNA中进行稳定的基因放大

摘要

提供了包含两个或多个稳定地保留在其染色体内之ＤＮＡ序列拷贝的转化的原核宿主细胞，所说的ＤＮＡ序列包含一编码有用多肽的基因，其中所说的拷贝是被内源性染色体ＤＮＡ序列分隔开的。还提供了生产所说已转化之宿主菌株的方法。所说的转化的宿主菌株与已经产生所说多肽的宿主菌株比较，其提高了有用多肽的生产量。优选的宿主菌株是产生高碱性蛋白水解酶的芽孢杆菌新种ＰＢ９２和产生耐热α淀粉酶的地衣形芽孢杆菌菌株Ｔ５以及它们的突变株或变异株。优选的多肽编码基因是来源于芽孢杆菌ＰＢ９２的蛋白酶编码基因和来源于地衣形芽孢杆菌菌株Ｔ５或其衍生株的α淀粉酶编码基因。

主权项

1.一种制备在其染色体中包含至少两个DNA序列拷贝的转化的原核宿主细胞的方法，所说的DNA序列编码一种有用的多肽，其中所说的拷贝被对宿主细胞是极端重要的内源性染色体DNA分隔开，所说的方法包括：在转化条件下，使包含至少一个整合到其染色体中的所说的DNA序列拷贝的受体宿主细胞与(a)包含至少一个所说DNA序列拷贝和至少一个标志基因及一个温度敏感性复制原点的DNA构建物或(b)包含所说DNA构建物的供体宿主细胞结合；以足够高浓度的抗生素为基础，对其中所说的DNA构建物被整合到所说转化体的染色体中的转化体进行选择；和从所说的转化体中分离包含至少两个所说的被对宿主细胞是极端重要的内源性DNA分隔开的DNA序列拷贝的转化的真核宿主细胞。