[发明专利]一种通过测序方法检测基因编辑脱靶的方法在审
| 申请号： | 202210501155.8 | 申请日： | 2022-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN115044661A | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 许志敏;常卫东;李红梅;王春晓 | 申请（专利权）人： | 上海达澈生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/6806;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京深川专利代理事务所(普通合伙) 16058 | 代理人： | 李焕焕 |
| 地址： | 201600 上海市松江区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种通过测序方法检测基因编辑脱靶的方法，包括DNA提取、sgRNA准备、DNA超声并纯化、DNA末端处理、核酸外切酶处理、T4PNK处理、DNA环化、线性DNA消化、Cas9消化、DNA处理、文库扩增十一个步骤。本发明的原理是利用Cas9体外核酸酶特性，在体外对基因组DNA进行切割，产物经处理后，通过测序或其他手段，实现对脱靶位点的筛选。Cas9体外消化基因组DNA、测序，实现了无偏检测。相比于现有GUIDE‑seq技术，不需额外引入dsODN，在各步骤共同支持下，在步骤10中实现了利用Cas9自身特性就可以切割目的片段，避免了转染效率不可控的问题；而且能够对全基因组进行检测，解决了dsODNs标签可能检测不到的遗漏情况。基于上述，本发明具有好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通过 方法 检测 基因 编辑 脱靶 | ||
【主权项】：
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