[发明专利]一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法

摘要

本发明公开了一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，用TAE/Mg2+缓冲液将双足DNA walker与封闭链block退火形成双链DNA walker/block；用TAE/Mg2+缓冲液将DNA‑H1、DNA‑H2、DNA‑H3、DNA‑H4退火形成发夹DNA‑H1，发夹DNA‑H2，发夹DNA‑H3，发夹DNA‑H4；用三(2‑羧乙基)膦)还原巯基修饰的DNA‑H1，然后滴至金电极表面孵育10小时，再用6‑巯基‑1‑己醇处理0.5‑1h；将双链DNA walker/block、不同浓度的APE1酶与发夹DNA‑H2混合滴至金电极表面进行反应；再将发夹DNA‑H3、发夹DNA‑H4混合滴至电极表面进行反应；在室温下将亚甲基蓝滴在电极表面，避光孵育，超纯水冲洗、N2吹干，得到检测APE1酶的超灵敏电极；将上述超灵敏电极置于PBS中，进行方波伏安法信号检测，得出不同浓度的APE1酶对应的SWV信号，并绘制出标准曲线；把待测样品加入到超灵敏电极表面，37℃下孵育，设定一样的检测条件，测得不同待测样品的SWV信号，获得APE1酶的特异性检测结果。