[发明专利]基于ddPCR检测人循环肿瘤细胞KRAS基因突变的引物、探针、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201911121768.3 | 申请日： | 2019-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN110684849A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 张惠丹;戴敬;杨丽萍;赵洪玉 | 申请（专利权）人： | 苏州绘真医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 32405 苏州欣达共创专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 范玉敏 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏州工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于ddPCR检测人循环肿瘤细胞KRAS基因突变的引物探针组、试剂盒及方法。其中，引物探针组包括检测KRAS基因2号外显子上第12号、第13号密码子突变位点的引物及探针，其中，各突变位点分别为：G12D、G12V、G12A、G12C、G12S、G12R以及G13D。本发明提供的引物和探针具有灵敏度高、特异性强的优点，引物和探针能够特异性结合突变序列，且结合稳定，能够实现单拷贝模板条件下的有效扩增，且单模板扩增的ddPCR可以消除野生型模板带来的干扰。本发明提供的试剂盒具有高效、成本低、精度高、灵敏度高、准确度高、重复性好、样本投入低、可以进行绝对定量检测的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 探针 引物 引物探针 灵敏度 试剂盒 扩增 循环肿瘤细胞 密码子突变 特异性结合 准确度 定量检测 特异性强 突变位点 突变序列 单拷贝 单模板 野生型 检测 位点 突变 样本 | ||
【主权项】：
1.一种基于ddPCR检测人循环肿瘤细胞KRAS基因突变的引物探针组，其特征在于，包括检测KRAS基因2号外显子上第12号、第13号密码子突变位点的引物及探针，其中，各突变位点分别为：G12D、G12V、G12A、G12C、G12S、G12R以及G13D；/n其中，用于检测KRAS基因2号外显子上第12号密码子各突变位点的上游引物序列为：/nGATTCTGAATTAGCTGTATCGTC（SeqID NO:1），/n用于检测KRAS基因2号外显子上第12号密码子各突变位点的下游引物序列为：/nGGCCTGCTCAAAATGACTG（SeqID NO:2），/n用于检测KRAS基因2号外显子上第13号密码子突变位点的上游引物序列为：/nGGTCCTGCACCAGTAATATG（SeqID NO:3），/n用于检测KRAS基因2号外显子上第13号密码子突变位点的下游引物序列为：/nTAGGCAAGAGTGCCTTGAC（SeqID NO:4），/n用于检测KRAS G12D突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCACTAGCTCCAAC（SeqID NO:5）/n用于检测KRAS G12V突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCACAAGCTCCAAC（SeqID NO:6），/n用于检测KRAS G12A 突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCACGAGCTCCAAC（SeqID NO:7），/n用于检测KRAS G12C 突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCAACAGCTCCAAC（SeqID NO:8），/n用于检测KRAS G12S突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCATCAGCTCCAAC（SeqID NO:9），/n用于检测KRAS G12R突变位点的荧光探针序列为：/nCCTACGCCAGCAGCTCCAAC（SeqID NO:10），/n用于检测KRAS G13D突变位点的荧光探针序列为：/nGATCATATTCGTTCACAAAATG （SeqID NO:11）。/n
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