[发明专利]MAP3K8基因敲除PK-15细胞系的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201911044827.1 | 申请日： | 2019-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN110862968A | 公开（公告）日： | 2020-03-06 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;张克山;闫鸣昊;郝军红;田宏;李丹;朱紫祥;茹毅;杨帆;张大俊;刘湘涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/90;C12N15/54;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 | 代理人： | 张立强 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及MAP3K8基因敲除PK‑15细胞系的构建方法及其应用。MAP3K8基因敲除的PK‑15细胞系PK‑15‑KO‑MAP3K8的保藏编号为CCTCC NO:C2019176。该细胞系的构建方法包括1：根据猪源MAP3K8基因序列分别设计两条sgRNA，将双链sg RNA与酶切后的lentiGuide‑EGFP载体连接得到重组慢病毒表达质粒lentiGuide‑EGFP‑MAP3K8‑sg RNA；2：将重组慢病毒表达质粒、病毒包装辅助质粒共转染PK‑15细胞；3：收集病毒液，过滤、超速离心浓缩纯化病毒；4：用感染复数MOI=30的慢病毒感染PK‑15细胞，然后用超速流式细胞分选系统进行单细胞分选；5：将分选得到的单克隆细胞进行扩大培养并测序鉴定。该细胞系能够促进FMDV和SVV增殖，提高病毒产量，可用于FMDV和SVV疫苗株的大规模细胞化培养和生产，并可为研究MAP3K8在病毒感染过程中的作用机制提供有力工具。 | ||
| 搜索关键词： | map3k8 基因 pk 15 细胞系 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
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