[发明专利]一种水稻原生质体分离与转化方法有效
| 申请号： | 201911018183.9 | 申请日： | 2019-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN110643566B | 公开（公告）日： | 2022-09-02 |
| 发明（设计）人： | 张建福;谢云杰;何炜;姜身飞;谢华安 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院水稻研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 350019 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种水稻原生质体分离与转化方法。涉及原生质体分离转化技术领域。分离方法为取水稻苗茎部和叶片制备成薄片，酶解，过筛，弃滤液，留残存的薄片；将酶解后残存的薄片用W5溶液洗脱回收，震荡，过筛收集滤液，将收集的全部滤液混合，离心，弃上清，得沉淀，和W5溶液重悬，离心弃上清，和MMg溶液混合。转化方法为将目标载体和原生质体悬浊液混匀，和PEG混匀，水浴，和W5溶液混合，并终止反应，离心，弃上清，再和W5溶液混合，转到入细胞培养板，避光培养。本发明能够较好地获得高质量水稻原生质体，并将其应用于后续研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水稻 原生 质体 分离 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种水稻原生质体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取水稻苗茎部和叶片制备成0.4-0.6mm薄片，将所述薄片和酶液按质量体积比1g:10-15ml混合，避光，25-30℃摇床，转速50rpm，酶解2.5-3.5h后，过300-400目筛，弃初滤液，留残存的薄片；/n(2)将步骤(1)所述残存的薄片用40-60ml W5溶液洗脱回收，再用力震荡8-12s、过300-400目筛收集滤液，并重复收集4-6次；/n(3)将步骤(2)收集的滤液各自通过水平转子200-300g离心3-4min，弃上清，留沉淀混匀，得原生质体A；/n(4)将步骤(3)所述原生质体A和10-20ml W5溶液混合，重悬所述原生质体A，水平转子400-500g离心3-4min，弃上清，得原生质体B，原生质体B和1ml MMg溶液混合，得原生质体悬浊液。/n
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