[发明专利]一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用有效
| 申请号： | 201910919503.1 | 申请日： | 2019-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN110592139B | 公开（公告）日： | 2021-09-03 |
| 发明（设计）人： | 范琦;叶博;赵振军;李佩佩;岳冬梅;王林美;张波 | 申请（专利权）人： | 辽宁省海洋水产科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 周媛媛;李馨 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用，属于生物技术领域。本发明利用细菌人工染色体克隆载体构建一个包括含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段、AnpeNPV多角体蛋白基因启动子序列和上游基因部分序列DNA片段、及多角体蛋白基因3’末端部分编码区序列和下游基因部分序列DNA片段的转移载体，将线性化转移载体质粒DNA与线性化的AnpeNPV基因组DNA共转染Tn‑High Five细胞，得到重组AnpeNPV。将该重组AnpeNPV基因组DNA转化至大肠杆菌中，获得AnpeNPV穿梭载体AnpeNPV‑bacmid。它既可以在大肠杆菌中以质粒DNA方式复制，亦可在Tn‑High Five昆虫细胞以及柞蚕蛹体内以病毒DNA方式复制，具有感染性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 柞蚕 核型 多角体 病毒 穿梭 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)利用细菌人工染色体克隆载体pSMART BAC构建具有BamH I、Avr II(Bln I)、HindIII和EcoR I单一克隆位点的衍生克隆载体pSMART BAC-N1；/n(2)将含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段lacZα:mini-attTn7:lacZα克隆至载体pSMART BAC-N1的BamH I和Avr II(Bln I)克隆位点上，构建得到中间载体pSMART BAC-N1/lacZα:mini-attTn7:lacZα；/n(3)将含有AnpeNPV多角体蛋白基因polh启动子序列和上游基因部分序列的DNA片段、及含有多角体蛋白基因3’末端部分编码区序列和下游基因部分序列的DNA片段依次克隆至中间载体pSMART BAC-N1/lacZα:mini-attTn7:lacZα的相应克隆位点处，构建转移载体pSMART BAC-N1/lacZα:mini-attTn7:lacZα/phΔN；/n(4)将步骤(3)制得的转移载体质粒DNA线性化，与线性化的AnpeNPV基因组DNA共转染Tn-High Five细胞，得到重组AnpeNPV；/n(5)将步骤(4)所得重组AnpeNPV的基因组DNA进行分离制备，并转化至大肠杆菌中，在含有氯霉素、X-Gal和IPTG的细菌培养板上进行蓝、白菌落筛选，挑取蓝色菌落进行液体培养，获得AnpeNPV穿梭载体AnpeNPV-bacmid。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于辽宁省海洋水产科学研究院，未经辽宁省海洋水产科学研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910919503.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
