[发明专利]一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法在审
| 申请号： | 201910915380.4 | 申请日： | 2019-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN110499278A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 韩炘;胥猛;徐立安 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82 |
| 代理公司： | 32274 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 邱兴天<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法，包括以下步骤：首先通过组合酶解液酶解银杏叶，得到银杏的原生质体；然后对得到的银杏原生质体进行分离、纯化，并且进行预处理，再利用PEG介导法将携带绿色荧光蛋白eGFP标签的p2FGW7.0质粒载体转入银杏原生质体中，经过培养，使其在银杏原生质体中表达。本发明构建得到银杏叶原生质体瞬时表达系统，操作简单易行，可以获得大量、完整、纯净的银杏叶原生质体，不受季节和地点的限制。本发明适用于银杏实生苗，利用幼嫩的叶即可得到较高质量的原生质体，原生质体活力可达90％，同时对于野外的成熟叶组织在一定程度上也适用。 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 银杏 银杏叶 绿色荧光蛋白eGFP 瞬时表达系统 原生质体分离 原生质体活力 预处理 质粒载体 组合酶解 成熟叶 实生苗 再利用 构建 介导 液酶 标签 野外 转入 携带 转化 | ||
【主权项】：
1.一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法，其特征在于，首先通过组合酶解液酶解银杏叶，得到银杏的原生质体；然后对得到的银杏原生质体进行分离、纯化，并且进行预处理，再利用PEG介导法将携带绿色荧光蛋白eGFP标签的质粒载体转入银杏原生质体中，经过培养，使其在银杏原生质体中表达。/n
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