[发明专利]一种肿瘤新生抗原免疫原性检测方法及检测平台有效
| 申请号： | 201910780061.7 | 申请日： | 2019-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN110514845B | 公开（公告）日： | 2022-09-27 |
| 发明（设计）人： | 潘有东;宋麒;万季;黄润元;肖安;刘刚;文颖 | 申请（专利权）人： | 深圳新合睿恩生物医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京冠和权律师事务所 11399 | 代理人： | 朱健 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙华区观澜街道新*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞培养和免疫原性检测技术领域，尤其涉及一种肿瘤新生抗原免疫原性检测方法及检测平台。具体而言，包括将人外周血单核细胞在体外培养13天、期间加入人类流感病毒肽段，并进行细胞因子、抗原肽段和免疫佐剂刺激活化，最后进行酶联免疫斑点法呈色反应和仪器扫描计数分析以检测肿瘤新生抗原的免疫原性。此外，本发明还涉及上述检测方法及检测平台在生物医学中的应用。与现有方法相比，本发明检测方法及检测平台具有检测耗时短、便利性高、实验细胞消耗少、检测成本低等优势和特点，因此可用于体外高通量检测肿瘤新生抗原的免疫原性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 新生 抗原 免疫原性 检测 方法 平台 | ||
【主权项】：
1.一种肿瘤新生抗原免疫原性检测方法，其特征在于：所述检测方法包括下列步骤：/n(1)第一天：将5x105个解冻的人外周血单核细胞培养于含有500μl完整RPMI细胞培养液的24孔培养板中，外加20ng/ml人类白细胞介素-4和100ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，放置于37℃细胞培养箱中48小时；/n(2)第三天：将不同浓度的人类流感病毒抗原肽段、5ng/ml人类白细胞介素-7和20μg/ml聚肌胞苷酸加入至细胞培养液中；/n(3)第五天：将500μl内含10ng/ml人类白细胞介素-7和人类白细胞介素-15以及40U/ml人类白细胞介素-2的RPMI细胞培养液加入至24孔培养板中，使总体积为1ml；/n(4)第八天：每三天进行一次细胞培养液更新，取出500μl旧培养液，加入500μl新鲜的内含10ng/ml人类白细胞介素-7和人类白细胞介素-15以及40U/ml人类白细胞介素-2的RPMI细胞培养液；/n(5)第十一天：收集24孔培养板中的所有非贴盘细胞，以RPMI细胞培养液清洗两次，并培养于不含任何细胞因子和刺激因子的完整RPMI细胞培养液500μl中48小时获得人外周血单核细胞衍生的T淋巴细胞；/n(6)第十三天：从套组中取出酶联免疫斑点法条带，加入200μl完整RPMI细胞培养液和不同浓度的人类流感病毒抗原肽段，所述完整RPMI细胞培养液内含有2x105个解冻的人外周血单核细胞和1x105个上述人外周血单核细胞衍生的T淋巴细胞，混合均匀后放置于37℃细胞培养箱中22小时，之后进行酶联免疫斑点法检测。/n
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