[发明专利]一种肿瘤新生抗原免疫原性检测方法及检测平台

权利要求书

1.一种肿瘤新生抗原免疫原性的非诊断性目的的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括下列步骤：

（1）第一天：将5x10⁵个解冻的人外周血单核细胞培养于含有500ul完整RPMI细胞培养液的24孔培养板中，外加20ng/ml人类白细胞介素-4和100ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，放置于37℃细胞培养箱中48小时；

（2）第三天：将不同浓度的人类流感病毒抗原肽段、5ng/ml人类白细胞介素-7和20ug/ml聚肌胞苷酸加入至细胞培养液中；

（3）第五天：将500ul内含10ng/ml人类白细胞介素-7和人类白细胞介素-15以及40U/ml人类白细胞介素-2的RPMI细胞培养液加入至24孔培养板中，使总体积为1ml；

（4）第八天：每三天进行一次细胞培养液更新，取出500ul旧培养液，加入500ul新鲜的内含10ng/ml人类白细胞介素-7和人类白细胞介素-15以及40U/ml人类白细胞介素-2的RPMI细胞培养液；

（5）第十一天：收集24孔培养板中的所有非贴盘细胞，以RPMI细胞培养液清洗两次，并培养于不含任何细胞因子和刺激因子的完整RPMI细胞培养液500ul中48小时获得人外周血单核细胞衍生的T淋巴细胞；

（6）第十三天：从套组中取出酶联免疫斑点法条带，加入200ul完整RPMI细胞培养液和不同浓度的人类流感病毒抗原肽段，所述完整RPMI细胞培养液内含有2x10⁵个解冻的人外周血单核细胞和1x10⁵个上述人外周血单核细胞衍生的T淋巴细胞，混合均匀后放置于37℃细胞培养箱中22小时，之后进行酶联免疫斑点法检测。

2.如权利要求1所述的检测方法，其步骤（1）和步骤（6）中所述完整RPMI细胞培养液内含10%热灭活人类血清AB、1%青链霉素混合液与谷氨酰胺、1%丙酮酸钠、1%非必需氨基酸、1%4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.1%两性霉素B和0.1%2-巯基乙醇。

3.如权利要求1所述的检测方法，其步骤（2）中所述不同浓度的人类流感病毒抗原肽段为FluMatrix1的序列片段58-66，其浓度分别为0.25ng/ml、1ng/ml和2ng/ml。

4.如权利要求1所述的检测方法，其步骤（6）中所述不同浓度的人类流感病毒抗原肽段为FluMatrix1的序列片段58-66，其浓度分别为0.25ng/ml、1ng/ml和2ng/ml。

5.如权利要求1-4任一项所述的检测方法在构建高通量肿瘤新生抗原免疫原性验证系统中的应用。

6.如权利要求1-4任一项所述的检测方法在生物医学中的应用。

7.一种根据权利要求1-4所述的检测方法的肿瘤新生抗原免疫原性检测平台，其特征在于：所述检测平台包括下列组成部分：

（1）完整RPMI细胞培养液；

（2）细胞因子和刺激因子；

（3）聚肌胞苷酸；

（4）人类流感病毒抗原肽段；

（5）酶联免疫斑点法呈色分析仪；

其中所述细胞因子和刺激因子包括人类白细胞介素-2、人类白细胞介素-4、人类白细胞介素-7、人类白细胞介素-15和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；所述人类流感病毒抗原肽段为FluMatrix1的序列片段58-66；

其中所述完整RPMI细胞培养液内含10%热灭活人类血清AB、1%青链霉素混合液与谷氨酰胺、1%丙酮酸钠、1%非必需氨基酸、1%4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.1%两性霉素B和0.1%2-巯基乙醇。

8.如权利要求7所述的检测平台在构建高通量肿瘤新生抗原免疫原性验证系统中的应用。