[发明专利]一种基于RT-LAMP-LFD检测猕猴桃褪绿环斑相关病毒的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种基于RT‑LAMP‑LFD检测猕猴桃褪绿环斑相关病毒(Actinidia chlorotic ringspot‑associated virus,AcCRaV)的引物及检测方法；引物包括内引物：FIP和BIP和外引物：F3和B3。检测方法包括以下步骤：S1、提取猕猴桃待检测样品RNA；S2、将提取的猕猴桃待检测样品RNA反转录为cDNA；S3、以猕猴桃待检测样品cDNA为模板，进行等温扩增；S4、利用LFD试纸条对步骤S3所得等温扩增物进行检测，判断猕猴桃待检测样品是否含有猕猴桃褪绿环斑相关病毒。本发明根据猕猴桃褪绿环斑相关病毒外壳蛋白核苷酸序列设计LAMP引物，实现了对猕猴桃褪绿环斑相关病毒的快速检测，可以在猕猴桃植株或组培苗中快速鉴定出是否含有该病毒，进而达到检测、监测、预警以及采取针对性措施的目的，减少病害带来的损失。

主权项

1.基于RT‑LAMP‑LFD检测猕猴桃褪绿环斑相关病毒的引物，其特征在于，包括4条引物：内引物：FIP和BIP；外引物：F3和B3，其中FIP和BIP的5′末端分别用异硫氰酸荧光素标记与生物素标记；各引物的序列分别如下：F3：CTTTTGTAAGATCATGCTTCCT，如SEQ ID NO.1所示；B3：TCTATTTCTATAGTGAATCGTCTTG，如SEQ ID NO.2所述；FIP：FITC‑GGTTAGATTGGAATGTCGTAAAGCTACCAGTGAATTTACAATCTCAG，如SEQ ID NO.3所示；BIP：Biotin‑AACTCATATCCTGGAACAACCATCCAGGACAAATGAGGCTACC，如SEQ ID NO.4所示。