[发明专利]一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法在审
| 申请号： | 201910749949.4 | 申请日： | 2019-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN110527712A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 刘慧玲;涂晓波;赵芳;万志刚;吕敬章;黄欣迪;匡燕云 | 申请（专利权）人： | 深圳市检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 44314 深圳市瑞方达知识产权事务所(普通合伙) | 代理人： | 张秋红;林俭良<国际申请>=<国际公布> |
| 地址： | 518000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法,该肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的方法，包括以下步骤：S1、提取待测样品DNA；S2、设计引物和荧光标记探针：以16S rRNA基因为参考，从GenBank中获取基因序列作为模板，合成引物和荧光标记探针；上游引物F的碱基序列：5’‑TCCAGGTCGGTTTCTATC‑3’；下游引物R的碱基序列：5’‑TCTGCCACCCTAATAACC‑3’；荧光标记探针序列P的碱基序列：5’‑FAM‑AGTACGAAAGGACA‑MGB‑3’；S3、建立实时荧光PCR反应体系，将步骤S1提取的待测样品DNA作为模板；将实时荧光PCR反应混合液、DNA模板、上游引物、下游引物、荧光标记探针、Rox参比染料混合并采用双蒸水补足，建立实时荧光PCR反应体系；S4、PCR扩增反应；S5、分析鼠源性成分。该方法具有操作简便、检测灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光标记探针 实时荧光PCR 碱基序列 鼠源性 待测样品 肉制品 反应混合液 检测灵敏度 上游引物F 下游引物R 合成引物 基因序列 染料混合 上游引物 设计引物 下游引物 双蒸水 检测 参比 参考 分析 | ||
【主权项】：
1.一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、提取待测样品DNA；/nS2、设计引物和荧光标记探针：以16S rRNA基因为参考，从GenBank中获取基因序列作为模板，合成引物和荧光标记探针；/n上游引物F的碱基序列：/n5’-TCCAGGTCGGTTTCTATC-3’；/n下游引物R的碱基序列：/n5’-TCTGCCACCCTAATAACC-3’；/n荧光标记探针序列P的碱基序列：/n5’-FAM-AGTACGAAAGGACA-MGB-3’；/nS3、建立实时荧光PCR反应体系：将步骤S1提取的待测样品DNA作为模板；将实时荧光PCR反应混合液、所述DNA模板、所述上游引物、所述下游引物、所述荧光标记探针、Rox参比染料混合并采用双蒸水补足，建立所述实时荧光PCR反应体系；/nS4、PCR扩增反应：将所述实时荧光PCR反应体系置于95℃的温度条件下进行预变性反应；再将置于95℃的温度条件下进行变性反应，并于60℃的温度条件下退火，依次循环30～45次，于60℃收集荧光信号；/nS5、分析鼠源性成分：测定并计算实时荧光PCR反应物的平均Ct值，并判断待测样品中是否含有鼠源性成分；/n当Ct值≤35.0，则判定为待测样品含有鼠源性成分；/n当Ct值≥40.0，则判定为待测样品不含有鼠源性成分；/n当35.0＜Ct值＜40.0，则重复步骤S1～S4，当再次扩增后Ct值仍为＜40.0，则判定待测样品含有鼠源性成分；当再次扩增后Ct值≥40.0，则判定为待测样品不含有鼠源性成分。/n
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