[发明专利]一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法

说明书

本发明涉及一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法,该肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的方法，包括以下步骤：S1、提取待测样品DNA；S2、设计引物和荧光标记探针：以16S rRNA基因为参考，从GenBank中获取基因序列作为模板，合成引物和荧光标记探针；上游引物F的碱基序列：5’‑TCCAGGTCGGTTTCTATC‑3’；下游引物R的碱基序列：5’‑TCTGCCACCCTAATAACC‑3’；荧光标记探针序列P的碱基序列：5’‑FAM‑AGTACGAAAGGACA‑MGB‑3’；S3、建立实时荧光PCR反应体系，将步骤S1提取的待测样品DNA作为模板；将实时荧光PCR反应混合液、DNA模板、上游引物、下游引物、荧光标记探针、Rox参比染料混合并采用双蒸水补足，建立实时荧光PCR反应体系；S4、PCR扩增反应；S5、分析鼠源性成分。该方法具有操作简便、检测灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及动物源性成分检测技术领域，更具体地说，涉及一种肉制品中 PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法。

背景技术

目前，我国对动物源性成分的检测普遍采用PCR扩增这种分子生物学方法，针对包括鼠源性成分的动物源性成分检测的专利和文章也都是针对细胞色素b设计引物探针，再进行PCR扩增。而16S rRNA基因在结构与功能上具有高度的保守性，由于大小适中，能利用测序技术较容易地得到其序列，被分类学家所接受，但少有用于动物源性成分检测的报道，未见应用于鼠源性成分检测。我们根据鼠细胞线粒体中16S rRNA基因设计引物探针，对食品中鼠源性成分进行检测，为快速检测鼠源性成分提供了新的途径。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，提供一种灵敏度高、检测方便快捷的肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的体系及方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：构造一种肉制品中PCR反应检测鼠源性成分的方法，包括以下步骤：

S1、提取待测样品DNA；

S2、设计引物和荧光标记探针：以16S rRNA基因为参考，从GenBank中获取基因序列作为模板，合成引物和荧光标记探针；

上游引物F的碱基序列：

5’-TCCAGGTCGGTTTCTATC-3’；

下游引物R的碱基序列：

5’-TCTGCCACCCTAATAACC-3’

荧光标记探针序列P的碱基序列：

5’-FAM-AGTACGAAAGGACA-MGB-3’；

S3、建立实时荧光PCR反应体系：将步骤S1提取的待测样品DNA作为模板；将实时荧光PCR反应混合液、所述DNA模板、所述上游引物、所述下游引物、所述荧光标记探针、Rox参比染料混合并采用双蒸水补足，建立所述实时荧光PCR反应体系；

S4、PCR扩增反应：将所述实时荧光PCR反应体系置于95℃的温度条件下进行预变性反应；再将置于95℃的温度条件下进行变性反应，并于60℃的温度条件下退火，依次循环30～45次，于60℃收集荧光信号；

S5、分析鼠源性成分：测定并计算实时荧光PCR反应物的平均Ct值，并判断待测样品中是否含有鼠源性成分；

当Ct值≤35.0，则判定为待测样品含有鼠源性成分；

当Ct值≥40.0，则判定为待测样品不含有鼠源性成分；

当35.0＜Ct值＜40.0，则重复步骤S1～S4，当再次扩增后Ct值仍为＜40.0，则判定待测样品含有鼠源性成分；当再次扩增后Ct值≥40.0，则判定为待测样品不含有鼠源性成分。