[发明专利]一种牙囊干细胞的鉴定方法、引物组及试剂盒有效
申请号: | 201910748269.0 | 申请日: | 2019-08-14 |
公开(公告)号: | CN110527716B | 公开(公告)日: | 2022-10-04 |
发明(设计)人: | 雷童;张晓霜;陈鹏;杜宏武 | 申请(专利权)人: | 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6876 | 分类号: | C12Q1/6876;C12Q1/6851;C12N15/11;G16B25/10;G16B45/00 |
代理公司: | 北京国林贸知识产权代理有限公司 11001 | 代理人: | 郑俊彦;许文娟 |
地址: | 102600 北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供了一种牙囊干细胞的鉴定方法、引物组及试剂盒,本发明根据牙囊干细胞的蛋白组学结果,针对HEXB基因,设计特异性引物,将所述特异性引物用于牙囊干细胞与其他相似来源干细胞的区分鉴定,由于引物的特异性高,不受样本的异质性的干扰,结果稳定、可靠,所述鉴定方法包括提取细胞总RNA,反转录获取cDNA模板以及实时荧光定量PCR。该方法不需要进行基于荧光抗体的表面标志物鉴定,节省了大量的时间和仪器试剂成本,并且本发明所述鉴定方法灵敏度好,对于牙囊干细胞与其他干细胞的区分和牙科组织工程具有很高的参考价值,适于推广应用。 | ||
搜索关键词: | 一种 干细胞 鉴定 方法 引物 试剂盒 | ||
【主权项】:
1.一种牙囊干细胞的鉴定方法,其特征在于,所述鉴定方法包括细胞总RNA的提取、反转录获取cDNA模板,再利用测定HEXB基因表达水平的特异性引物进行荧光定量PCR扩增,根据扩增结果进行统计学检验,用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为参考基因组(ΔCt)将Ct值标准化,并使用建立的基于效率的ΔΔCt方法将每个样品与进行比较,为了评估表达强度,将归一化的Ct值(ΔCt)转换为归一化的表达值,根据下式:EN=2^(-ΔCt),计算2^(-ΔΔCt),作图分析,HEXB基因mRNA相对高表达的来源于牙囊组织的成纤维状细胞,即是牙囊干细胞。/n
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