[发明专利]一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法

摘要

本发明涉及一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法及应用，属于电化学发光检测技术领域。开发并首次验证了铕掺杂磷酸钆在低电位下激发可达到的高效电化学发光行为，一方面解决了发光材料在电极上的固定问题，另一方面解决了抗原抗体活性的有效保存问题。根据对不同浓度的原降钙素响应的电化学发光信号强度不同，实现对原降钙素的检测。通过采用F检验、T检验展示本方法的准确度和精密度，测试结果均小于理论值，说明该方法准确可靠。

主权项

1.一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；（2）在处理好的电极表面滴加6 μL、浓度为0.5~5 mg/mL的铕掺杂磷酸钆分散液作为传感基底材料，4 °C下晾干成膜；（3）加入3~8 mM巯基乙酸在4 °C下浸泡5 h后转入EDC/NHS混合体系中浸泡30 min来活化羧基；（4）继续在4 °C条件下浸泡浓度为5~15 μg/mL的原降钙素抗体1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗净电极表面，4°C下晾干；（5）在质量浓度为1~3%的牛血清白蛋白中浸泡来封闭非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，常温下晾干；（6）滴加6 μL、浓度为0.0001~50 ng/mL的原降钙素抗原，在室温下孵化1 h后，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，室温下晾干；（7）继续滴加6 μL、浓度为2~4 mg/mL的钯功能化的氧化亚铜立方晶捕获抗体孵化液于电极表面，室温下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液缓慢冲洗电极表面，室温下晾干。