[发明专利]一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法

权利要求书

1.一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在处理好的电极表面滴加6 μL、浓度为0.5~5 mg/mL的铕掺杂磷酸钆分散液作为传感基底材料，4 °C下晾干成膜；

（3）加入3~8 mM巯基乙酸在4 °C下浸泡5 h后转入EDC/NHS混合体系中浸泡30 min来活化羧基；

（4）继续在4 °C条件下浸泡浓度为5~15 μg/mL的原降钙素抗体1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗净电极表面，4°C下晾干；

（5）在质量浓度为1~3%的牛血清白蛋白中浸泡来封闭非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，常温下晾干；

（6）滴加6 μL、浓度为0.0001~50 ng/mL的原降钙素抗原，在室温下孵化1 h后，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，室温下晾干；

（7）继续滴加6 μL、浓度为2~4 mg/mL的钯功能化的氧化亚铜立方晶捕获抗体孵化液于电极表面，室温下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液缓慢冲洗电极表面，室温下晾干。

2.如权利要求1所述的一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法，其特征在于，所述基底材料铕掺杂磷酸钆的制备，包括以下步骤：

（1）酚醛树脂模板球的制备

在45~55 mL去离子水中加入0.1806 g 3-氨基酚和质量分数为25%的氨水90~100 µL，在30ºC下搅拌10 min，形成清晰的溶液， 加入100~150 µL甲醛溶液后，30 s后溶液变白。再持续搅拌4 h后，将所得混合物转移到100 mL聚四氟乙烯内衬的不锈钢高压釜中，在100ºC下保持24 h， 最后用去离子水和酒精洗涤两次将样品离心纯化，最终在空气中干燥；

（2）铕掺杂磷酸钆的制备

首先，制备前驱体：将3 g尿素、0.5~1.5 mmol 硝酸钆水溶液、0.01~0.08 mmol硝酸铕水溶液和0.1~0.3 g上述合成的酚醛树脂模板球分别加入到20~30 mL去离子水中， 搅拌10~40 min，超声15 min，最后将混合物放入100 mL圆底烧瓶中，在70~100ºC下加热3 h， 离心收集沉淀，用去离子水洗涤三次，得到碳酸氢氧钆前驱体， 将得到的前驱体超声分散于25mL去离子水中， 然后将0.1~0.2 g溶于10mL去离子水的磷酸氢氨溶液滴加到上述溶液中，10 min后在搅拌下加入0.1~0.2 g的十六烷基三甲基溴化铵，最终将混合溶液转移到50 mL高压反应釜中并在180ºC下加热12 h， 然后用去离子水和乙醇先后洗了三遍将所得样品纯化， 最后，将所得样品干燥后在500ºC下煅烧2 h，得到分级铕掺杂磷酸钆空心球。