[发明专利]一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法有效

专利信息
申请号: 201910715125.5 申请日: 2019-08-05
公开(公告)号: CN110441293B 公开(公告)日: 2021-09-24
发明(设计)人: 魏琴;薛经纬;鞠熀先;王萌迪;赵磊;孙晓君;杨兴龙 申请(专利权)人: 济南大学
主分类号: G01N21/76 分类号: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327;G01N27/48
代理公司: 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 代理人: 赵凤
地址: 250022 山东*** 国省代码: 山东;37
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 基于 蛋白 活性 保护 电化学 发光 传感器 制备 方法
【说明书】:

发明涉及一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法及应用,属于电化学发光检测技术领域。开发并首次验证了铕掺杂磷酸钆在低电位下激发可达到的高效电化学发光行为,一方面解决了发光材料在电极上的固定问题,另一方面解决了抗原抗体活性的有效保存问题。根据对不同浓度的原降钙素响应的电化学发光信号强度不同,实现对原降钙素的检测。通过采用F检验、T检验展示本方法的准确度和精密度,测试结果均小于理论值,说明该方法准确可靠。

技术领域

本发明涉及一种基于铕掺杂磷酸钆作为新的低电位电化学发光发射器并与核壳钯功能化的氧化亚铜纳米晶发生能量转移的传感器制备及应用,具体是采用铕掺杂磷酸钆空心球作为发光材料,钯功能化氧化亚铜作为猝灭剂,并且采用多肽链实现对抗体的定向固定,实现了在-1.15 V的低电位激发,有效保护了蛋白质的活性,提高对免疫物质检测的可行性,综上制备的一种检测原降钙素的猝灭型电化学发光传感器,属于电化学发光检测技术领域。

背景技术

SIRS指全身炎症反应即机体对多种细胞因子/炎症介质的反应。内毒素是全身炎症反应SIR的触发因素,目前尚无明显的治疗方法。因此,原降钙素作为血清中SIRS的典型生物标志物,对SIRS的早期准确可靠诊断起着至关重要的作用。

目前检测原降钙素的分析方法主要有放射免疫分析法、酶联免疫分析法和试剂盒法,但是所用的试剂有效期短,具有放射性污染,检测周期长,灵敏度低,步骤繁琐等缺点。为了克服以上传统分析方法的缺点,本发明设计了一种特异性强、灵敏度高、无放射性污染、操作快速简便的电致化学发光免疫分析方法。

电化学发光是由电化学反应直接或间接引发的化学发光现象,作为电化学和化学发光互相交叉渗透的产物,该方法既有发光分析的超高灵敏度,又结合了电化学电位可控的优点,所以引起了分析化学和生物分析等诸多领域的高度重视。传统的发光材料具有优秀的发光效果但是难以固载于电极表面,新兴的许多发光体,例如硫化镉等镉基材料具有生物毒性并且必须施加高电位激发。因此,无毒、低电位激发以保存生物活性且电极固载性好的发光材料成为了研究的重点。因此,本发明制备了一种铕掺杂磷酸钆空心球作为基底,以钯功能化氧化亚铜作为猝灭探针,构建了一种双猝灭型的电致化学发光传感器用于原降钙素的检测。

发明内容

本发明的目的是针对现有传感器的生物活性保护提供一种适合的应对方法,并且针对现有的全身炎症反应综合症的检测方法存在的问题,提供一种新颖的基于钯功能化氧化亚铜猝灭铕掺杂磷酸钆空心球的电致化学发光免疫传感器的制备并实行对实际样品的检测应用,实现对全身炎症反应综合症的疾病标志物的快速、灵敏、特异、高效检测,并且整个方法所用原料成本低,制备工艺简单,耗时小,具有良好的应用前景。

为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:

一种基于蛋白活性保护的电化学发光传感器制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光,在超纯水和乙醇中超声清洗,氮气吹干;

(2)在处理好的电极表面滴加6 μL、浓度为0.5~5 mg/mL的铕掺杂磷酸钆分散液作为传感基底材料,4 °C下晾干成膜;

(3)加入3~8 mM巯基乙酸在4 °C下浸泡5 h后转入EDC/NHS混合体系中浸泡30 min来活化羧基。

(4)继续在4 °C条件下浸泡浓度为5~15 μg/mL的原降钙素抗体1 h,用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗净电极表面,4°C下晾干;

(5)在质量浓度为1~3%的牛血清白蛋白中浸泡来封闭非特异性活性位点,用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,常温下晾干;

(6)滴加6 μL、浓度为0.0001~50 ng/mL的原降钙素抗原,在室温下孵化1 h后,用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面,室温下晾干;

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于济南大学,未经济南大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910715125.5/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top