[发明专利]基于类弹性蛋白展示N-端脑钠肽前体双抗原表位的制备方法在审
| 申请号： | 201910687576.2 | 申请日： | 2019-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN110358785A | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 胡学军;杨春光;付鑫 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 | 代理人： | 卫茂才 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种利用大肠埃希菌制备类弹性蛋白展示N‑端脑钠肽前体双抗原表位重组蛋白的方法，其中设计了NT‑proBNP第13‑20位氨基酸残基表位和第63‑71位氨基酸残基表位，通过柔链将这两个表位连接并通过柔链与类弹性蛋白标签融合，将编码后的以上重组蛋白融合基因合成并克隆到原核表达载体上，构建成ELP展示NT‑proBNP双抗原表位基因的融合表达载体，利用大肠埃希菌表达系统表达ELP展示NT‑proBNP双抗原表位重组蛋白。本发明依据ELP多次可逆相变循环(ITC)的突出特性高效、快速、简便地纯化出NT‑proBNP双抗原表位重组蛋白，直接用于夹心ELISA法检测NT‑proBNP校准品。 | ||
| 搜索关键词： | 抗原表位 重组蛋白 表位 氨基酸残基 大肠埃希菌 类弹性蛋白 脑钠肽 前体 展示 制备 类弹性蛋白标签 抗原表位基因 融合表达载体 原核表达载体 夹心ELISA法 表达系统 可逆相变 融合基因 校准品 克隆 合成 融合 检测 | ||
【主权项】：
1.基于类弹性蛋白(elastic‑like polypeptide, ELP)展示N‑端脑钠肽前体(amino‑terminal pro‑brain natriuretic peptide, NT‑proBNP)双抗原表位的制备方法，可以制备用于夹心ELISA法检测NT‑proBNP的校准品，其特征在于：首先将用柔链连接的NT‑proBNP第13‑20位氨基酸残基表位、第63‑71位氨基酸残基表位与ELP用Poly N柔链连接融合，紧接着将编码以上重组蛋白基因合成并克隆到原核表达载体上，构建成NT‑proBNP双抗原表位基因的融合表达载体，最后利用大肠埃希菌表达系统制备用于夹心ELISA法检测NT‑proBNP的校准品。
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