[发明专利]一种基于双酶切的简化基因组测序文库的构建方法有效
| 申请号： | 201910665025.6 | 申请日： | 2019-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN110343741B | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 李发根;甘四明;贾翠蓉;翁启杰;周长品;朱显亮 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院热带林业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吕纪涛 |
| 地址： | 510520 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于双酶切的简化基因组测序文库的构建方法，属于全基因组重测序技术领域，包括利用限制性内切酶MspI和MseI对基因组DNA进行酶切，将接头序列分别连接到酶切产物上，得到连接产物；将连接产物进行等质量混合，将得到的混合物进行双轮磁珠分选，得到350bp的片段；以得到的片段为模板，用引物对进行PCR扩增，将得到的扩增产物纯化后，构建得到基于双酶切的简化基因组测序文库；所述引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。采用本发明提供的构建方法最终开发的SNP位点有225,744个，提高了SNP位点的开发。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 双酶切 简化 基因组 序文 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于双酶切的简化基因组测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取6个不同个体巨桉叶片的基因组DNA，利用限制性内切酶MspI和MseI对得到的基因组DNA分别进行酶切，得到酶切产物；2)将接头序列分别连接到步骤1)得到的酶切产物上，得到连接产物；所述接头序列包括GTACA、TACGC、AGTCA、GCATC、CTGAA和CATCG，1个接头序列连接到1个酶切产物上；3)将所述步骤2)分别得到的连接产物进行等纳摩尔量混合，将得到的混合物进行双轮磁珠分选，得到350bp的片段；4)以所述步骤3)得到的片段为模板，用引物对进行PCR扩增，将得到的扩增产物纯化后，构建得到基于双酶切的简化基因组测序文库；所述引物对的上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。
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