[发明专利]一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉高产菌株的选育方法

摘要

本发明公开了一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉高产菌株的选育方法，该哈茨木霉高产菌株通过出发菌株进行紫外诱变、接种发酵瓶、发酵液过滤、平板培养基的准备、抗性筛选的步骤选育得到，根据菌种选育确定的数量，优先选择对马铃薯根腐病致病菌镰刀菌抑菌圈大的菌株进行分离纯化传代，完成哈茨木霉高产菌株的快速筛选。本发明提供的哈茨木霉高产菌株选育方法，可有效提供菌种选育效率，从而缩短菌种选育周期，以前菌种选育要经过6～8代选育，现在仅需3～4代即可完成，时间缩短一半；本发明提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，从而为哈茨木霉发酵提供优良的菌种，在防控马铃薯镰刀菌根腐病方面提供了可靠保证。

主权项

1.一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉高产菌株的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一，孢子悬浮液制备：将哈茨木霉出发菌株M-17菌种接种到PDA培养基斜面上进行培养，结束后用生理盐水冲洗菌种斜面，经玻璃珠打散，去除菌丝，得到含有孢子的悬浮液；/n步骤二，紫外诱变：将步骤一得到的含有孢子的悬浮液置于平底培养皿中，进行紫外诱变；/n步骤三，平板分离筛选：接着将步骤二诱变后的悬浮液稀释后涂布于PDA培养基平板，黑暗条件下，25～28℃培养，待长出菌落后，挑选出菌落形态发生变化的菌株，进行单菌落划线分离，经二次分离纯化得到较纯的诱变菌株；/n步骤四，接种发酵瓶：将步骤三得到的诱变菌种在无菌室内采用挖块接种法接于发酵瓶，将发酵瓶放入摇床上振摇，培养结束后，将发酵到终点的发酵瓶进行过滤，取其过滤液；/n步骤五，平板的培养基的准备：将PDA培养基预热融化，在无菌室内倒入平板内，待培养基凝固后，再倒入内含敏感菌的检定培养基；/n步骤六，抗性筛选：用进样器吸取发酵液的过滤液直接点在含敏感菌的检定培养基上，每两个点样之间距离大于20mm，所有样品点完后，将平板培养基放入培养箱中进行培养，黑暗条件下25～28℃培养8～10d；/n步骤七，将步骤六培养8～10d的平板从培养箱中取出，对每个抑菌圈进行测量，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行确认，完成哈茨木霉高产菌株的快速筛选。/n