[发明专利]一种提取鲍肝胰腺RNA的方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，具体为：鲍肝胰腺在液氮中磨碎后用Trizol进行组织裂解，加入氯仿乳化，用异丙醇和5M NaCl沉淀，后转入RNA吸附柱中，经75%乙醇和5M NaCl溶液洗涤，再经75%乙醇洗涤后用RNase‑free水溶解得到鲍肝胰腺总RNA，总RNA经75%乙醇和5M NaCl二次沉淀和后续再纯化，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA，本发明不仅可彻底消除鲍肝胰腺总RNA沉淀过程中产生的褐色沉淀，使得到的鲍肝胰腺总RNA质量好、浓度高、稳定性好，而且操作简单、成本低廉；同时，对其它多糖和色素含量高的水产动物组织总RNA的提取有借鉴作用。

主权项

1.一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取鲍肝胰腺，在液氮中磨碎后，转入含有Trizol的RNase‑free EP管中，混匀后离心，取上清液转入新的RNase‑free EP管中；S2、往步骤S1的上清液中加入1/5上清液体积的氯仿，混匀充分乳化呈乳白色，室温静置2‑5 min，离心后取上清液转入新的RNase‑free EP管中；S3、往步骤S2的上清液中分别加入与上清液等体积的异丙醇和5 mol/L NaCl，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；S4、往步骤S3的RNA吸附柱中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl，室温静置2‑5 min，离心后弃掉液体；S5、往步骤S4的RNA吸附柱中加入75%乙醇，室温静置2‑5 min，离心后弃掉液体；S6、将步骤S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，离心2‑3 min；S7、将步骤S6的RNA吸附柱充分晾干；S8、将步骤S7的RNA吸附柱转入一个新的无RNase的1.5 mL离心管中，加入RNase‑free水，室温放置2‑5 min，离心后得到鲍肝胰腺总RNA；S9、往步骤S8的离心管中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl进行二次沉淀，充分混合后静置2‑5 min，将混合物转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；S10、重复步骤S5‑S8，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA。