[发明专利]一种提取鲍肝胰腺RNA的方法

权利要求书

1.一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取鲍肝胰腺，在液氮中磨碎后，转入含有Trizol的RNase-free EP管中，混匀后离心，取上清液转入新的RNase-free EP管中；

S2、往步骤S1的上清液中加入1/5上清液体积的氯仿，混匀充分乳化呈乳白色，室温静置2-5 min，离心后取上清液转入新的RNase-free EP管中；

S3、往步骤S2的上清液中分别加入与上清液等体积的异丙醇和5 mol/L NaCl，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；

S4、往步骤S3的RNA吸附柱中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl，室温静置2-5 min，离心后弃掉液体；

S5、往步骤S4的RNA吸附柱中加入75%乙醇，室温静置2-5 min，离心后弃掉液体；

S6、将步骤S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，离心2-3 min；

S7、将步骤S6的RNA吸附柱充分晾干；

S8、将步骤S7的RNA吸附柱转入一个新的无RNase的1.5 mL离心管中，加入RNase-free水，室温放置2-5 min，离心后得到鲍肝胰腺总RNA；

S9、往步骤S8的离心管中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl进行二次沉淀，充分混合后静置2-5 min，将混合物转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；

S10、重复步骤S5-S8，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA。

2.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，所述鲍肝胰腺的用量为50-70 mg。

3.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S1中所述Trizol的用量为1 mL。

4.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S4、S9中所述的75%乙醇和5mol/L NaCl的添加量均为300 μL。

5.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S4和步骤S5的整个操作均重复1次。

6.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S5中所述的75%乙醇的添加量为500-600 μL。

7.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，在步骤S7中，将步骤S6的RNA吸附柱在室温下放置5-10 min，或者置于超净工作台通风3-5 min，以充分晾干。

8.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S8中所述的RNase-free水的添加量为30-100 μL。

9.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S1中所述的离心为4 ℃、12000 rpm离心5 min，步骤S2中所述的离心为4 ℃、12000 rpm离心10 min，步骤S3、S4、S5、S9中所述的离心均为4 ℃ 、12000 rpm离心30 s，步骤S6、S8中所述的离心为4℃、12000 rpm离心2 min。

10.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S10中，步骤S5-S8重复1次。