[发明专利]一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法在审
| 申请号： | 201910601859.0 | 申请日： | 2019-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN110511971A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 陈可泉;王莹莹;杨赛;张阿磊;莫晓芳;周宁;许晟;曹飞;欧阳平凯 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12P19/26 | 分类号： | C12P19/26 |
| 代理公司： | 32285 南京先科专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 叶帅东<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种超声辅助酶法降解几丁质生产N‑乙酰氨基葡萄糖的方法，该方法包括如下步骤：（1）利用微生物发酵产几丁质酶，获得浓缩酶液；（2）称取几丁质粉末，依次加入纯水和磷酸缓冲液，再加入几丁质酶进行超声辅助酶解反应；（3）待反应结束后，向超声辅助酶解组中加入DNS，煮沸5min，测定还原糖含量。该方法的优点在于利用超声手段快速简单地获得大量的N‑乙酰氨基葡萄糖，相比未处理的酶解几丁质法，前者的效率更高，获得的最高转化效率是未处理的2.9倍。且该方法所用时间较短，耗材少，操作简单，酶解效率高，无化学污染，环境友好，具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 几丁质 乙酰氨基葡萄糖 超声辅助酶解 几丁质酶 未处理 超声辅助酶法 磷酸缓冲液 微生物发酵 化学污染 环境友好 酶解效率 浓缩酶液 转化效率 煮沸 还原糖 超声 称取 耗材 降解 酶解 应用 生产 | ||
【主权项】：
1.一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，微生物发酵产几丁质酶，并获得浓缩酶液/n将Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1（ATCC BAA-2140T） 菌株接种到种子液培养基中，37℃、200rpm 下培养 12 h，再以体积分数 5% 的接种量接入装有产酶发酵培养基摇瓶中，在温度为 26℃，转速为 200rpm，初始 pH7.5 下发酵 72 h 后收集发酵液；将获得的发酵液在4℃离心机中8000g离心，分离菌体，收集上清液，得到几丁质粗酶液，将粗酶液在旋转蒸发仪上抽真空浓缩，浓缩2-3h，得到原来0.3-0.6倍体积的浓缩酶液；/n步骤2，超声辅助几丁质酶降解几丁质/n称取0.005g-0.03g几丁质，加入1-5ml纯水和缓冲液，再加入100-500 μL浓缩酶液，震荡均匀后在37℃，60%-100%功率的超声波清洗机中在25-60℃下超声0.5-3h；/n步骤3，超声处理结束后，将反应体系沸水煮5min，灭活，再向反应体系中加入1-5mlDNS，沸水煮5min，冷却至室温，观察体系的颜色变化情况，并离心后取上清液，在波长540nm下测吸光度即得还原糖的含量。/n
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