[发明专利]一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法

权利要求书

1.一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，微生物发酵产几丁质酶，并获得浓缩酶液

将Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1（ATCC BAA-2140^T） 菌株接种到种子液培养基中，37℃、200rpm 下培养 12 h，再以体积分数 5% 的接种量接入装有产酶发酵培养基摇瓶中，在温度为 26℃，转速为 200rpm，初始 pH7.5 下发酵 72 h 后收集发酵液；将获得的发酵液在4℃离心机中8000g离心，分离菌体，收集上清液，得到几丁质粗酶液，将粗酶液在旋转蒸发仪上抽真空浓缩，浓缩2-3h，得到原来0.3-0.6倍体积的浓缩酶液；

步骤2，超声辅助几丁质酶降解几丁质

称取0.005g-0.03g几丁质，加入1-5ml纯水和缓冲液，再加入100-500 μL浓缩酶液，震荡均匀后在37℃，60%-100%功率的超声波清洗机中在25-60℃下超声0.5-3h；

步骤3，超声处理结束后，将反应体系沸水煮5min，灭活，再向反应体系中加入1-5mlDNS，沸水煮5min，冷却至室温，观察体系的颜色变化情况，并离心后取上清液，在波长540nm下测吸光度即得还原糖的含量。

2.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述的几丁质酶液产于菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1的保藏编号为CGMCC 3438^T ，ATCC BAA-2140^T。

3.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述种子液培养基的组分为：2 g/L 葡萄糖，2 g/L 蛋白胨，0.7 g/LKH₂PO₄，0.3 g/L K₂HPO₄·3H₂O，0.4 g/LMgSO₄·7H₂O，pH 7.0。

4.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，产酶发酵培养基的组分为：3 g/L 粉粒几丁质，3 g/L 菊粉，3 g/L 尿素，0.7 g/L KH₂PO₄，0.3 g/L K₂HPO₄·3H₂O ，0.5 g/L MgSO₄·7H₂O。

5.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步骤3反应体系中加有占其体积分数为0.1-0.2%的抗生素。

6.根据权利要求5所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述抗生素为卡纳或四环素。

7.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步骤2中超声时温度为37℃。

8.根据权利要求1所述的一种超声辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步骤3中纯水和缓冲液的体积比1：1。