[发明专利]一种基于茎尖的辣木染色体核型分析方法

摘要

本发明公开了一种基于茎尖的辣木染色体核型分析方法，包括以下主要步骤：S1取材：在晴朗的上午采集健康辣木新枝茎尖为0.5‑1cm为试验材料；S2预处理:置于对二氯苯中预处理2.5h；S3:固定与保存；S4.染色体标本制备：采用酶解去壁低渗法，经前低渗、酶解、后低渗、涂片获得较佳的染色体标本，其中酶解采用4％纤维素酶和5％果胶酶混合物酶解4h；S5.染色:吉姆萨染色15min，S6:镜检。本发明提供了一种简单易操作，适用于原位PCR、FISH操作的辣木染色体核型分析方法，为辣木细胞学研究提供技术基础；本发明首次报道了辣木核型公式为2n＝2x＝2n＝28m，属于1B类型，核型不对称系数60.29％，属于较原始物种，为辣木的起源，演化及遗传育种提供一定理论依据。

主权项

1.一种基于茎尖的辣木染色体核型分析方法，其特征在于：该分析方法具体步骤如下：S1:取材在晴朗的上午采集健康、快速生长期的辣木新枝茎尖、小叶或大叶；S2：预处理把刚采集的材料进行预处理；S3:固定与保存倒掉预处理液，清水冲洗后转入卡诺固定液，在黑暗4℃环境下固定24h，移弃固定液，直接用来染色体制片；S4:染色体标本制备(1)前低渗:把S3固定的茎尖置于蒸馏水中进行前低渗30min；(2)酶解:把步骤(1)的茎尖置于盛有5％纤维素酶和4％果胶酶混合液的1ml离心管中，并置于37℃的恒温水浴锅中酶解3‑5h；(3)后低渗:吸取酶液，缓缓地沿着管壁加入蒸馏水，后低渗30min；(4)后固定:吸取蒸馏水，滴加临时配制的固定液，后固定15min；(5)涂片：把玻片、固定液均置于冰面上，取一张玻片，先滴固定液，再夹取茎尖组织置于玻片上，用解剖针挑取少量顶端组织，并迅速捣碎再均匀涂抹在载玻片上，再从一端滴加固定液使细胞扩散，接着在火焰上迅速烘烤，自然风干；S5:染色将缓冲液(甲液、乙液)与吉姆萨原液按比例配制成工作液，再把干燥的制片置于吉姆萨染色液中染色10‑20min，清水冲洗干净，置烘箱37℃烘干；S6:镜检用POTIKA正立显微镜观察，Optika Vision pro拍照系统拍照，在40X物镜下对单位视野面积内处于分裂中期的细胞进行计数，选择30个染色体分散且形态较好的细胞进行染色体数目统计，选取5个染色体形态清晰且无重叠的细胞用Photoshop图像软件进行核型分析。