[发明专利]表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建在审

专利信息
申请号: 201910524213.7 申请日: 2019-06-18
公开(公告)号: CN110305852A 公开(公告)日: 2019-10-08
发明(设计)人: 陈素娟;郑思文;彭大新;秦涛 申请(专利权)人: 扬州大学
主分类号: C12N7/01 分类号: C12N7/01;C12N15/63;A61K39/295;A61K39/215;A61K39/245;A61P31/22;A61P31/14
代理公司: 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 代理人: 刘妍妍
地址: 225009 *** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明涉及生物技术领域,提供了表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建方法,用于猪伪狂犬病和流行性腹泻的防控。其构建方法包括:重组病毒rPRV‑TX‑gE/TK的构建与重组病毒rPRV‑gE/TK‑S1的构建。研制的表达猪流行性腹泻病毒主要保护性抗原基因S1基因的重组伪狂犬病毒疫苗rPRV‑gE/TK‑S1,与常规疫苗相比,不仅可以为这两种猪病的防控提供疫苗候选株,而且可以起到一针防两病的功能。
搜索关键词: 构建 猪流行性腹泻病毒 重组伪狂犬病病毒 重组病毒 疫苗 保护性抗原基因 重组伪狂犬病毒 生物技术领域 流行性腹泻 猪伪狂犬病 常规疫苗 种猪
【主权项】:
1.表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建方法,其特征在于,步骤如下:(一)重组病毒rPRV‑TX‑gE/TK的构建:(1)合成针对TK基因的鉴定验证引物;(2)提取rPRV‑TX‑gE基因组DNA和pSKTKRL‑GFP载体质粒;(3)转染与纯化;(4)双基因报告基因的剔除;(5)双缺失株rPRV‑TX‑gE/TK的鉴定;(6)抗原纯化;(7)检测血清抗体;(8)小鼠免疫攻毒试验;(二)重组病毒rPRV‑gE/TK‑S1的构建:(1)针对PEDV的S1基因设计并合成引物;(2)提取病毒RNA;(3)RT‑PCR扩增病毒基因片段;(4)设计引物;(5)目的片段的PCR扩增与载体pSKTKRL‑GFP PCR线性化;(6)构建重组质粒pSKTKRL‑PEDV‑S1;(7)转染与纯化;(8)重组病毒rPRV‑gE/TK‑S1中S1基因的鉴定。
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