[发明专利]表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建在审
| 申请号: | 201910524213.7 | 申请日: | 2019-06-18 |
| 公开(公告)号: | CN110305852A | 公开(公告)日: | 2019-10-08 |
| 发明(设计)人: | 陈素娟;郑思文;彭大新;秦涛 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
| 主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N15/63;A61K39/295;A61K39/215;A61K39/245;A61P31/22;A61P31/14 |
| 代理公司: | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人: | 刘妍妍 |
| 地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | 本发明涉及生物技术领域,提供了表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建方法,用于猪伪狂犬病和流行性腹泻的防控。其构建方法包括:重组病毒rPRV‑TX‑gE‑/TK‑的构建与重组病毒rPRV‑gE‑/TK‑‑S1的构建。研制的表达猪流行性腹泻病毒主要保护性抗原基因S1基因的重组伪狂犬病毒疫苗rPRV‑gE‑/TK‑‑S1,与常规疫苗相比,不仅可以为这两种猪病的防控提供疫苗候选株,而且可以起到一针防两病的功能。 | ||
| 搜索关键词: | 构建 猪流行性腹泻病毒 重组伪狂犬病病毒 重组病毒 疫苗 保护性抗原基因 重组伪狂犬病毒 生物技术领域 流行性腹泻 猪伪狂犬病 常规疫苗 种猪 | ||
【主权项】:
1.表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组伪狂犬病病毒的构建方法,其特征在于,步骤如下:(一)重组病毒rPRV‑TX‑gE‑/TK‑的构建:(1)合成针对TK基因的鉴定验证引物;(2)提取rPRV‑TX‑gE‑基因组DNA和pSKTKRL‑GFP载体质粒;(3)转染与纯化;(4)双基因报告基因的剔除;(5)双缺失株rPRV‑TX‑gE‑/TK‑的鉴定;(6)抗原纯化;(7)检测血清抗体;(8)小鼠免疫攻毒试验;(二)重组病毒rPRV‑gE‑/TK‑‑S1的构建:(1)针对PEDV的S1基因设计并合成引物;(2)提取病毒RNA;(3)RT‑PCR扩增病毒基因片段;(4)设计引物;(5)目的片段的PCR扩增与载体pSKTKRL‑GFP PCR线性化;(6)构建重组质粒pSKTKRL‑PEDV‑S1;(7)转染与纯化;(8)重组病毒rPRV‑gE‑/TK‑‑S1中S1基因的鉴定。
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