[发明专利]一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法

摘要

本发明公开一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法，属于生物芯片技术领域。高通量微流控芯片包括LAMP扩增试剂、DNA/cDNA模板、ddH₂O、LAMP阳性对照、LAMP阴性对照、检测芯片、芯片探针、微流控芯片分析仪，所述检测芯片置于恒温扩增微流控芯片分析仪内，所述芯片探针包括SEQ ID NO：1～42所示的核苷酸序列；用于检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪巴氏杆菌和猪流感病毒的特异性核酸片段。本发明在1小时内能够完成检测，并且检出限为5×10^‑2ng/μL，准确区分不同猪病病原，具有快速检测、敏感高、特异准确的特点。

主权项

1.一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片，包括LAMP扩增试剂、DNA/cDNA模板、ddH₂O、LAMP阳性对照、LAMP阴性对照、检测芯片、芯片探针、微流控芯片分析仪，所述检测芯片置于恒温扩增微流控芯片分析仪内，其特征在于，所述芯片探针包括SEQ ID NO：1～42所示的核苷酸序列；用于检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪巴氏杆菌和猪流感毒的特异性核酸片段；各个探针DNA序列如下：猪瘟病毒探针：SEQ ID NO：1‑5SEQ ID NO：1 CATGCCCAAGACACACCTTASEQ ID NO：2 CGTGGCATCGTATACCGGSEQ ID NO：3 CCTCTGCAGCACCCTATCAGGGGTCGCTAGGGTGAAATCACSEQ ID NO：4 TGCTGTACATGGCACATGGAGTTCCTCCACTCCCATTGGTTSEQ ID NO：5 CGTACTCCCATCACGTGGT；猪繁殖与呼吸综合征病毒探针：SEQ ID NO：6‑11SEQ ID NO：6 TGCTTAGGCTGGAGGGTGSEQ ID NO：7 ATGGCACTGCTAGGCAAATSEQ ID NO：8 GCCCTGAACACATTCAAGGGGGAGCATTGGACCGTCTCTGTSEQ ID NO：9 AGCATAAGGGCGGTCTTGGTTTCAAGGCAGGCAGGATCASEQ ID NO：10 TTATGCTCACAACAGCCCTGAACSEQ ID NO：11 ACTGGCTGAGGTAATGCATTTG；猪圆环病毒2型探针：SEQ ID NO：12‑17SEQ ID NO：12 GGGAGTCTGGTGACCGTTSEQ ID NO：13 CCATCCCACCACTTGTTTCTSEQ ID NO：14 ACGCTTCTGCATTTTCCCGCTCGAGCAGCACCCTGTAACGSEQ ID NO：15 CACGTCATTGTGGGGCCACCTTCCAGTATGTGGTTTCCGGSEQ ID NO：16 TTCAAAAGTTCAGCCAGCCCSEQ ID NO：17 TGTGGTAAAAGCAAATGGGCT；猪圆环病毒3型探针：SEQ ID NO：18‑23SEQ ID NO：18 TCCAGTTTTTTCCGGGACATSEQ ID NO：19 AACACTTGGCTCCAAGACGSEQ ID NO：20 CTTTTTCTCCAGACCCACCCCAAAAGCAGTGCTCCCCATTGSEQ ID NO：21 TTCCCGCCAGAATTGGTTTGGGGCGGAAAGTTCCACTCGTAASEQ ID NO：22 ACACATATGACCCCACCGTSEQ ID NO：23 GGTGAAGTAACGGCTGTGTTT；副猪嗜血杆菌探针：SEQ ID NO：24‑27SEQ ID NO：24 CGAAAGCAACGGATATCGTSEQ ID NO：25 CACCACCGAATTTCTCAGAASEQ ID NO：26 CTGCTTTCGCGTGTTGGATTGCTCTTGTAGTAGCAGCTGACGSEQ ID NO：27 GCCGATCGTGGTTGCGGTAAACTCTTGTTCTACACGCTCT；猪肺炎支原体探针：SEQ ID NO：28‑33 SEQ ID NO：28 AGGCAGCAACTTCAACAASEQ ID NO：29 ATCAGATCCAGTAATTAGTCGASEQ ID NO：30 GGCGCTGGACTTAAATTAGCTCAAAAAACCAGGATGCACAASEQ ID NO：31 ATTGCCCCTGAAAATGGAAGTTCATAGGCAACAATCGGAATSEQ ID NO：32 GCTTGCTGAGTGAGTCAGTTATSEQ ID NO：33 AGTTGGAACTGCTGTTAATACA；猪巴氏杆菌探针：SEQ ID NO：34‑37SEQ ID NO：34 TGTCGGTAGTCTTTTATTTGGSEQ ID NO：35 AACGTAACTCAACATGGAAATSEQ ID NO：36 TCAAGGAAGCAGATTGGCTCAAGGCAAAGAAAAGCACAGTSEQ ID NO：37 GCGCAACTGATTGGACGTTACAAGGAAATATAAACCGGCA；猪流感病毒探针：SEQ ID NO：38‑42SEQ ID NO：38 CATGCCCAAGACACACCTTASEQ ID NO：39 CGTGGCATCGTATACCGGSEQ ID NO：40 CCTCTGCAGCACCCTATCAGGGGTCGCTAGGGTGAAATCACSEQ ID NO：41 TGCTGTACATGGCACATGGAGTTCCTCCACTCCCATTGGTTSEQ ID NO：42 CGTACTCCCATCACGTGGT。