[发明专利]一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法

说明书

本发明公开一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法，属于生物芯片技术领域。高通量微流控芯片包括LAMP扩增试剂、DNA/cDNA模板、ddH₂O、LAMP阳性对照、LAMP阴性对照、检测芯片、芯片探针、微流控芯片分析仪，所述检测芯片置于恒温扩增微流控芯片分析仪内，所述芯片探针包括SEQ ID NO：1～42所示的核苷酸序列；用于检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪巴氏杆菌和猪流感病毒的特异性核酸片段。本发明在1小时内能够完成检测，并且检出限为5×10^‑2ng/μL，准确区分不同猪病病原，具有快速检测、敏感高、特异准确的特点。

技术领域

本发明涉及生物芯片技术领域，具体说是涉及一种检测猪呼吸道疫病病原的高通量微流控芯片及检测方法。

背景技术

近年来，猪呼吸道疫病是对养猪业危害最大、最广泛的重要常见疫病之一，严重危害养猪业发展。猪主要呼吸道疫病有猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病、副猪嗜血杆菌、猪喘气病、猪肺疫、猪流感等多种，致病因素复杂，一般以混合感染和继发感染的形式存在，造成临床检测致病原程序复杂，需要多次检测才能正确判定。

微流控芯片技术可把样品检测过程集成到一个数平方厘米的芯片上，具有集成化、样品消耗少、通量高等优势，而LAMP技术的优点是灵敏度高、反应用时短、基因扩增和产物的检测可一步完成，灵敏度及反应时间均大为优于PCR反应。将两者结合起来，可实现对核酸的高通量快速检测。对于发展强大的生物分子快速诊断具有重大的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速、可视化，可以同时检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、副猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体、猪巴氏杆菌、猪流感病毒高通量微流控芯片及检测方法。

为实现本发明目的所使用的技术方案为：

一种检测猪呼吸道疫病的高通量微流控芯片，包括LAMP扩增试剂、DNA/cDNA模板、ddH₂O、LAMP阳性对照、LAMP阴性对照、检测芯片、芯片探针、微流控芯片分析仪，所述检测芯片置于恒温扩增微流控芯片分析仪内，所述芯片探针用于检测猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）、副猪嗜血杆菌（HPS）、猪肺炎支原体（MPS）、猪巴氏杆菌（SP）和猪流感毒（SIV）特异性核酸片段的LAMP引物；各个探针DNA序列如下：

猪瘟病毒探针：SEQ ID NO：1-5

SEQ ID NO：1 CATGCCCAAGACACACCTTA

SEQ ID NO：2 CGTGGCATCGTATACCGG

SEQ ID NO：3 CCTCTGCAGCACCCTATCAGGGGTCGCTAGGGTGAAATCAC

SEQ ID NO：4 TGCTGTACATGGCACATGGAGTTCCTCCACTCCCATTGGTT

SEQ ID NO：5 CGTACTCCCATCACGTGGT；

猪繁殖与呼吸综合征病毒探针：SEQ ID NO：6-11

SEQ ID NO：6 TGCTTAGGCTGGAGGGTG

SEQ ID NO：7 ATGGCACTGCTAGGCAAAT

SEQ ID NO：8 GCCCTGAACACATTCAAGGGGGAGCATTGGACCGTCTCTGT