[发明专利]一种单细胞拉曼光谱技术测定氨氧化古菌代谢活性的方法

摘要

本发明提供了一种单细胞拉曼光谱技术测定氨氧化古菌代谢活性的方法，包括如下步骤：利用N组含有不同浓度的同位素D₂O标记的培养基培养氨氧化古菌，并对所述氨氧化古菌细胞菌液进行离心、洗涤、风干，再选取一定量的细胞区域进行拉曼光谱的测定，根据N组培养基中所述同位素D₂O的浓度和计算获得的C‑D％绘制标准曲线，获取回归方程；提供氨氧化古菌样品进行代谢活性分析。上述方法可用于定量分析氨氧化古菌的代谢活性，该方法是进行原位检测，检测速度快、检测精度高、样品消耗量少、对细胞菌体没有破坏性，适用范围广。

主权项

1.一种单细胞拉曼光谱技术测定氨氧化古菌代谢活性的方法，包括如下步骤：提供N组含有同位素D₂O标记的培养基，且所述N组培养基中所述同位素D₂O的浓度各不相同，其中，N大于等于5；采用所述N组含有同位素D₂O标记的培养基分别对氨氧化古菌进行培养，培养至氨氧化古菌体中D原子达到饱和，收集氨氧化古菌细胞菌液；将所述氨氧化古菌细胞菌液进行离心、洗涤，得到高浓度的洗涤后的氨氧化古菌细胞菌液；将所述高浓度的洗涤后的氨氧化古菌细胞菌液滴加到载玻片上进行风干，选取一定量的细胞区域进行拉曼光谱的测定；以2170cm^‑1作为峰中心、260cm^‑1作为宽度，计算不同浓度D₂O标记氨氧化古菌的拉曼光谱2040～2300cm^‑1范围的C‑D特征区域的积分光谱强度；以2950cm^‑1作为峰中心、300cm^‑1作为宽度，计算不同浓度D₂O标记氨氧化古菌的拉曼光谱2800～3100cm^‑1范围的C‑H特征区域的积分光谱强度，计算不同浓度D₂O标记氨氧化古菌的C‑D特征区域的积分光谱强度占C‑D特征区域和C‑H特征区域的总积分光谱强度的百分比，标记为C‑D％；根据N组培养基中所述同位素D₂O的浓度和计算获得的C‑D％绘制标准曲线，获取回归方程；提供含有同位素D₂O标记的培养基培养待测的氨氧化古菌样品，得到氨氧化古菌细胞菌液；将所述氨氧化古菌细胞菌液进行离心、洗涤，得到高浓度的洗涤后的氨氧化古菌细胞菌液，将所述高浓度的洗涤后的氨氧化古菌细胞菌液滴加到载玻片上进行风干，选取一定量的细胞区域进行拉曼光谱的测定；分析拉曼光谱2800～3100cm^‑1范围的C‑H特征区域的积分光谱强度，分析所述氨氧化古菌的代谢活性。