[发明专利]一种适用于转基因杜鹃的阳性基因检测方法

摘要

本发明提供一种适用于转基因杜鹃的阳性基因检测方法，属于转基因检测技术领域，包括总DNA的提取；以Bar‑F：CCACTCGTAACCAGTAAGCC，Bar‑R：GTAGGACGACTCAGTGTA，EF1α‑F:TGTTGCAAAGACGACCGAC，EF1α‑R：CGGCCATCTGTAGCGATCTT作为引物，进行PCR反应；电泳；回收PCR产物；地高辛标记探针；基因组DNA酶切；转膜、固定；杂交；洗膜、信号检测。本发明从DNA提取，PCR反应条件、基因组DNA酶切、固定、杂交、洗膜条件进行优化，提供一种快速、方便、价格较低、高效的检测转基因杜鹃的阳性基因的Southern杂交方法。

主权项

1.一种适用于转基因杜鹃的阳性基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)总DNA的提取；2)采用紫外分光光度计法对DNA溶液进行质量测定和浓度定量；3)PCR反应：以EF1α基因作为内参基因，Bar基因为目的基因，引物序列为Bar‑F：CCACTCGTAACCAGTAAGCC，Bar‑R：GTAGGACGACTCAGTGTA，EF1α‑F:TGTTGCAAAGACGACCGAC，EF1α‑R：CGGCCATCTGTAGCGATCTT；4)琼脂糖凝胶电泳；5)Southern杂交：回收PCR产物；地高辛标记探针；转基因杜鹃基因组DNA酶切；转膜；固定；杂交；洗膜；信号检测。